Prednosti i nedostaci višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije (MLSM)
Višefotonska laserska skenirajuća mikroskopija je eksperimentalna metoda koja se temelji na tehnologiji laserske skenirajuće mikroskopije, koja pruža bolje mogućnosti optičkog rezanja za trodimenzionalno promatranje. Metoda pobuđivanja višefotonske fluorescencije koristi crvenu svjetlost dugih valnih duljina ili blisku infracrvenu svjetlost za prikupljanje fluorescentnih slika visoke rezolucije uzoraka, što uzrokuje minimalnu štetu živim primjercima. Stoga je prikladan za snimanje živih stanica, posebno debelih živih tkiva kao što su rezovi mozga, embriji itd. Studije snimanja cijelih organa ili čak cijelih tijela.
Prednosti su sljedeće:
1. Koristite crveno svjetlo ili infracrveno svjetlo za pobuđivanje, a raspršenje svjetlosti je malo (raspršenje malih čestica obrnuto je proporcionalno četvrtoj potenciji valne duljine).
2. Nije potrebna rupica i može se prikupiti više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike.
3. Rupica ne može razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranog područja ili područja fokusa, a omjer signala i šuma višefotonske slike u dubokim slojevima je dobar.
4. Uzorak lako apsorbira i prigušuje ultraljubičastu ili vidljivu svjetlost koja se koristi za pobuđivanje jednim fotonom prije nego što zraka dosegne žarišnu ravninu i teško je pobuditi duboke slojeve.
5. Što se tiče promatranja biološkim mikroskopom, prvo što treba uzeti u obzir je ne oštetiti aktivno stanje samog organizma i održati protok vode, koncentraciju iona, kisika i hranjivih tvari. U slučaju promatranja svjetla, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar količine zračenja i svjetlosne energije kako se stanice ne bi oštetile.
6. Višefotonska mikroskopija također ima mnoge prednosti. Na primjer, u smislu trodimenzionalne rezolucije, dubinskog prodiranja, učinkovitosti raspršenja, pozadinskog svjetla, omjera signala i šuma, kontrole itd., postoje transcendentne karakteristike koje prijašnji laserski mikroskopi nisu imali ili nisu mogli parirati.
Višefotonska konfokalna laserska skenirajuća mikroskopija proširena je na različita istraživanja i polja primjene. Može provoditi trodimenzionalno nedestruktivno promatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i može poboljšati rezoluciju i omjer signala i šuma sustava. Korištenje višefotonskih ekscitacijskih materijala Promjene u svojstvima također mogu ostvariti trodimenzionalnu pohranu podataka o visini i trodimenzionalnu mikro-strojnu obradu u bilo kojem smjeru, što ima veliku vrijednost primjene. Vjeruje se da će s daljnjim razvojem strojeva, materijala, laserske tehnologije itd. vezanih uz višefotonsku konfokalnu mikroskopiju fotonska konfokalna laserska skenirajuća mikroskopija dobiti veći razvoj i širu primjenu.
Nedostaci su sljedeći:
1. Može prikazati samo fluorescenciju.
2. Ako uzorak sadrži kromofore koji mogu apsorbirati pobudno svjetlo, kao što su pigmenti, uzorak se može oštetiti toplinom.
3. Razlučivost je malo smanjena. Iako se može poboljšati korištenjem konfokalnih rupa u isto vrijeme, doći će do gubitka signala.
4. Ograničeni skupim ultrabrzim laserima, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
