Biomikroskopija s obzirom na volumen blokova tkiva
Biološka mikroskopija Do sada su hladna fiksacija, zamrznuti ultratanki rezovi i sušenje smrzavanjem rutinske metode za rendgenske mikropresjeke tkiva i stanica. Pojedinosti ove metode objašnjene su kako slijedi:
Za biološke mikroskope s kondenzatorom, kondenzor se može pomicati gore-dolje kako bi svjetlina bila umjerena, a otvor blende promjenjivog svjetla također se može mijenjati kako bi se postigla umjerena svjetlina 9b. Ako je svjetlo sunčano, kondenzator se može odgovarajuće podići, a otvor blende varijabilnog izvora svjetlosti može se odgovarajuće povećati. Ako je svjetlo prejako, sabirna leća se može odgovarajuće spustiti, a otvor svjetla koje se siječe može se odgovarajuće smanjiti. Ako se i dalje osjećate blještavo u ovom slučaju, možete odabrati odgovarajući filter i postaviti ga na nosač ispod kondenzatora. Ovaj hrast će moći dobiti svjetlinu koja vas zadovoljava. Naravno, podešavanje gornjeg i donjeg položaja kondenzora, podešavanje veličine otvora varijabilnog optičkog očitanja i odabir prikladnog filtra zahtijeva određeno razdoblje prakse za stjecanje iskustva.
Vrlo važno pitanje u biološkoj mikroskopiji je da se u procesu uzorkovanja i odvajanja stanica, nakon sušenja smrzavanjem i ugradnje smole (FD), nakon zamrzavanja ultratankih agregata i nakon sušenja smrzavanjem, sadržaj 65 elemenata u svakom dijelu mora pažljivo rukovati. Stanice koje se analiziraju ne mogu se oštetiti. Budući da rendgenska mikroanaliza ne samo da uključuje mnogo koraka, već i puno košta. Ako su analizirane stanice oštećene ili mrtve stanice nakon dugog vremena i obrade u više koraka, vrlo je žalosno donositi pogrešne zaključke. Na primjer, kardiomiociti odvojeni tretmanom kolagenazom imaju dva oblika, jedan je dugi štapić
Biomikroskopija Količina i raspodjela elektrolita u ove dvije vrste stanica prilično su različite. Na je vrlo visok, a K vrlo nizak u kružnim kardiomiocitima, a koncentracija ca u nematodama je vrlo visoka. Nakon provjere drugim metodama analize, dokazano je da su visoki Na i niski K okruglih stanica te visoki Ca u mitohondrijima posljedica oštećenja stanične membrane tijekom procesa odvajanja stanica. Metoda ledeno hladne fiksacije stanica i tkiva obično je da se prvo usvoji kaljenje i fiksacija, a zatim ih pohrani u tekućem dušiku. Za učinak konzerviranja vrlo je važna fiksacija kaljenjem. Žive stanice ili svježa tkiva bogata su vodom. Prilikom gašenja, dijelovi stanica ili tkiva koji su u izravnom kontaktu sa smrvljenim rashladnim sredstvom (posebno kada se gasi tekućim dušikom) često se najprije smrzavaju i fiksiraju, stvarajući tako "ljusku" koja sprječava središnje dijelove stanica. zgnječeno i hladno fiksirano. Stoga se pri analizi mikropodručja X-linije često otkrije da u središtu većih stanica postoje kristali leda. Kako bi se spriječilo da se to dogodi, tvar s točkom taljenja višom od one tekućeg dušika, ali nižom od one 806c koristi se kao pokvareno rashladno sredstvo. Takvih tvari ima mnogo, ali najlakše ih je nabaviti, najjeftiniji je koncentrirani propan (vrelište - 42.120c, talište - 187.10c, molekulska težina 44,1), a brzina hlađenja je najveća . Ali njegov nedostatak je što je zapaljiv.
Biološki mikroskop može staviti mišićno vlakno na poseban stalak, tako da kada kontrakcija mišićnog vlakna dosegne određenu fazu i treba ga fiksirati, odmah pokrenite mlaznicu za prskanje tekućeg propana na mišićno vlakno da ga ugasi i učvrsti. Zatim su mišićna vlakna zajedno s okvirom izvađena i stavljena u tekući dušik. Ako fiksirate krvne stanice ili izolirane stanice, prvo koncentrirajte stanice centrifugiranjem pri maloj brzini, prenesite stanice u srebrnu bočicu dobre toplinske vodljivosti, stavite bočicu u tekući propan i zamrznite radi fiksacije. Prilikom fiksiranja pankreasa štakora u Hallovom laboratoriju, dva čelična bloka prethodno su ohlađena tekućim helijem (ili tekućim dušikom), a dva bakrena bloka stegnuta su pincetom i postavljena na prednji i stražnji dio gušterače kako bi se ugasila i fiksirala gušterača. Tkiva ili stanice mogu se pohraniti u tekućem dušiku za dugotrajno skladištenje nakon gašenja i fiksiranja.
Biološka mikroskopija Uz trenutno najcjenjeniju metodu zamrznutog ultratankog presjeka, postoji još jedna tehnika taloženja koju koriste znanstvenici. Tvar se dodaje kako bi se formirao sediment s komponentom koja se analizira kako bi se imobilizirala prije analize, a sediment se zatim analizira. Na primjer, ljudi često koriste oksalat i piroantimonat za taloženje Ca u mišićnim stanicama. Prvi nije dovoljno osjetljiv na nisku koncentraciju Ca u citoplazmi; piroantimonat je osjetljiviji i može stvarati elektron-guste naslage sa slobodnim Ca u mozgu, ali piroantimonat nije kompatibilan s natrijem, manganom, barijem, željezom Naslage se također stvaraju i manje su specifične. Proces pripreme uzorka sličan je pripremi ultratankih uzoraka ultratankih presjeka s običnim transmisijskim elektronskim mikroskopom, razlika je u tome što je 3-postotni kalijev piroantimonat (fosfatni pufer fiziološka otopina, pH 7,6) fiksiran 6 sati prije fiksacije, a na ultratanke rezove obojenih mišića, Crne naslage su viđene u srednjim linijama traka A i 2 svakog sarkomera, a neobojeni rezovi korišteni su za mikroanalizu X-zrakama. Diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB) korišten je za taloženje tvari koje sadrže hem i tako dalje. Kombinacija reakcije histokemijske precipitacije i mosta mikrodiferencijacije rendgenskih zraka može se razmotriti u laboratorijima koji nemaju uvjete zamrznutih ultratankih presjeka. Polukvantitativno se može napraviti prema visini vrha elemenata koji se analiziraju
