Usporedba konfokalnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa
Mikroskop je glavni alat za promatranje stanica. Ovisno o izvoru svjetlosti, može se podijeliti u dvije kategorije: optički mikroskop i elektronski mikroskop. Prvi koristi vidljivu svjetlost (ultraljubičasti mikroskop do ultraljubičastog svjetla) kao izvor svjetlosti, dok drugi koristi snop elektrona kao izvor svjetlosti. Obični optički mikroskop i laserski konfokalni mikroskop pripadaju istom optičkom mikroskopu.
I. Opći optički mikroskop
Obični biološki mikroskop sastoji se od tri dijela, i to: ① sustav osvjetljenja, uključujući izvor svjetla i kondenzator; ② sustav optičkog povećanja, koji se sastoji od objektiva i okulara, glavno je tijelo mikroskopa, kako bi se uklonile sferne i kromatske aberacije, okulari i objektivi sastoje se od složene grupe leća; ③ mehanički uređaj, koristi se za pričvršćivanje materijala i promatranje pogodnosti.
Objekt mikroskopa je jasan ne samo da se određuje povećanjem, već i snagom razlučivosti mikroskopa (rezolucija), moć razlučivosti odnosi se na mikroskop (ili ljudsko oko od cilja 25 cm) koji može razlikovati objekt u malim intervalima sposobnosti da razlikovati veličinu moći razlučivanja određuje valna duljina svjetlosti i brzina kretanja zrcala te indeks loma medija, izražen u formuli:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 gdje je: n=indeks loma medija;=kut otvora zrcala (uzorak na otvoru leće objektiva kuta napetosti), NA=brzina otvora zrcala (numerički otvor blende). Kut otvora zrcala mora uvijek biti manji od 180°, tako da je zui vrijednost sina/2 nužno manja od 1.
Indeks loma stakla koje se koristi u proizvodnji optičkih leća je 1,65 ~ 1,78, indeks loma medija koji se koristi što je bliže staklu to je bolji. Za suhu leću objektiva, medij za zrak, zrcalna brzina usta je općenito 0.05 ~ 0,95; uljne leće s cedrovim uljem kao medijem, zrcalna usta stopa može biti blizu 1,5.
Obična svjetlosna valna duljina od 400~700nm, tako da vrijednost razlučivosti mikroskopa neće biti manja od 0,2 μm, moć razlučivosti ljudskog oka je 0,2 mm, tako da opći dizajn mikroskopa nema povećanje je obično 1000X.
Drugo, laserski konfokalni skenirajući mikroskop
Laserski konfokalni skenirajući mikroskop (laserski konfokalni skenirajući mikroskop), s laserom kao izvorom svjetlosti za skeniranje, brzo skeniranje slike točka po točka, linija po linija, površina po površina, laser za skeniranje i fluorescentna zbirka zajedničkog objektiva, točka fokusiranja lasera za skeniranje , ali i trenutno oslikavanje točke objekta. Zbog kraće valne duljine laserske zrake, zraka je vrlo fina, pa konfokalni laserski skenirajući mikroskop ima visoku rezoluciju, oko 3 puta veću od običnog optičkog mikroskopa. Sustav se fokusira jednom i skeniranje je ograničeno na jednu ravninu uzorka. Kada dubina fokusiranja nije ista, mogu se dobiti slike različitih dubinskih razina uzorka, te se informacije o slici pohranjuju u računalu, pomoću računalne analize i simulacije, mogu prikazati trodimenzionalnu strukturu uzorka stanice .
