Detaljno opišite korake odabira i metode fluorescentnih sondi za konfokalnu mikroskopiju
U pokusima s konfokalnim mikroskopima, neki eksperimentalni indikatori mogu se detektirati korištenjem autofluorescencije samog uzorka ili egzogenih tvari, ali većina tvari koje se ispituju nemaju mjerljivu fluorescenciju i moraju biti obilježene fluorescentnim sondama. Ima mjerljiv fluorescentni signal. Dakle, kako odabrati fluorescentne sonde za konfokalnu mikroskopiju?
1. Odredite pokazatelje koji se ispituju prema svrsi pokusa
Nakon što se odredi indeks detekcije, također se određuje raspon odabira fluorescentnih sondi. Vidi se da je izbor fluorescentne sonde za korištenje u pokusu određen svrhom pokusa. Na primjer, ako je svrha eksperimenta proučavanje promjena kalcijevih iona u kardiomiocitima kada se pojavi fibrilacija atrija, može se utvrditi da su tvar koja se ispituje ioni kalcija u kardiomiocitima, a raspon odabira fluorescentnih sondi ograničen je na sonde kalcijevih iona koje mogu označiti žive stanice. Igla.
2. Odredite raspon dostupnih fluorescentnih sondi
Za nove eksperimentalne tvari ili indikatore, ako svrha eksperimenta nije istraživanje novih fluorescentnih sondi, možete odabrati primjenu zrelih sondi i metoda označavanja. Tip ili raspon fluorescentnih sondi koje mogu označiti tvar koja se ispituje može se odrediti pretraživanjem mjerodavne literature ili kataloga proizvoda poznatih tvrtki za reagense u zemlji i inozemstvu.
3. Istražite ispunjavaju li karakteristike fluorescentne sonde zahtjeve za pripremu fluorescentnih uzoraka
Karakteristike fluorescentnih sondi izravno utječu na označavanje uzoraka i eksperimentalne rezultate. Stoga je prije odabira fluorescentnih sondi i označavanja uzoraka u eksperimentu potrebno u potpunosti razumjeti njihove fluorescentne karakteristike. Karakteristike fluorescentnih sondi koje treba ispitati uključuju:
1. Reakcijske karakteristike svjetlosnih sondi i uzoraka
2. Osjetljivost i intenzitet fluorescencije fluorescentnih sondi
3. Spektralna svojstva uzoraka obilježenih fluorescentnim sondama
4. Stabilnost fluorescencije
5. Interakcija između višestruke fluorescencije u uzorku
