Određivanje broja mikroorganizama-Mikroskopska metoda izravnog brojanja!
Rast populacije bakterija očituje se povećanjem broja stanica ili povećanjem staničnog materijala. Metode za određivanje broja stanica uključuju izravno mikroskopsko brojanje, brojanje na ploči, procjenu zamućenosti spektrofotometrom, najvjerojatniji broj MPN i membransku filtraciju. (membranska filtracija) itd. Metode za mjerenje stanične tvari uključuju određivanje suhe mase stanice, određivanje određenih staničnih komponenti kao što su sadržaj dušika, sadržaj RNA i DNA, te određivanje produkata metabolita. Ukratko, postoji mnogo metoda za mjerenje rasta mikroba, od kojih svaka ima svoje prednosti i nedostatke. Metodu treba odabrati prema specifičnim zahtjevima rada. Ovaj eksperiment uglavnom predstavlja mikroskopsku metodu izravnog brojanja koja se obično koristi u proizvodnji i znanstveno-istraživačkom radu.
1. Zahtjevi namjene
1. Pojasniti princip brojanja pločom za brojanje krvnih stanica.
2. Ovladati metodom brojanja mikroorganizama pomoću ploče za brojanje krvnih stanica.
2. Osnovna načela
Metoda izravnog brojanja mikroskopom jednostavna je, brza i intuitivna metoda kojom se mala količina suspenzije uzorka za testiranje stavlja na posebno stakalce s određenom površinom i volumenom (također se naziva bakteriometar) i broji izravno pod mikroskopom. Metode. Trenutno, najčešće korišteni bakteriometri u zemlji i inozemstvu uključuju: hemocitometar, Peteroff-Hauser bakteriometar i Hawksley bakteriometar itd. Svi se mogu koristiti za brojanje kvasca, bakterija, spora plijesni i drugih suspenzija, a osnovni principi su isti. Posljednja dva bakterijska brojača imaju ukupni volumen od 0.02 mm3 nakon što su pokriveni pokrovnim staklom, a udaljenost između pokrovnog stakla i stakalca je samo 0,02 mm. Stoga se uljna imerzijska leća može koristiti za promatranje i otkrivanje manjih stanica poput bakterija. računati. Uz korištenje ovih bakteriometara, postoji i metoda procjene koja izravno promatra omjer površine razmaza i površine vidnog polja pod mikroskopom. Ova metoda se općenito koristi za bakteriološko ispitivanje mlijeka. Prednosti mikroskopske metode izravnog brojanja su intuitivna, brza i jednostavna za rukovanje. Međutim, nedostatak ove metode je što je izmjereni rezultat obično zbroj mrtvih i živih bakterija. Trenutačno postoje neke metode za prevladavanje ovog nedostatka, kao što je kombiniranje mikrokomorne kulture bojenja živih bakterija (kratko vrijeme) i dodavanje inhibitora stanične diobe kako bi se postigla svrha brojanja samo živih bakterija.
Ovaj eksperiment koristi hemocitometar kao primjer za izvođenje izravnog brojanja pod mikroskopom. Za korištenje druga dva bakteriometra, pogledajte upute svakog proizvođača. Izravno brojanje pod mikroskopom pomoću hemocitometra često je korištena metoda brojanja mikroba. Ploča za brojanje je poseban tobogan s četiri utora koji tvore tri platforme; šira platforma u sredini podijeljena je na dvije polovice kratkim vodoravnim utorom, a sa svake strane platforme nalazi se rešetkasta rešetka. Svaka kvadratna mreža podijeljena je na devet velikih kvadrata, a veliki kvadrat u sredini je soba za brojanje. Struktura ploče za brojanje krvnih stanica prikazana je na slici {{0}}. Općenito postoje dvije specifikacije za ljestvicu komore za brojanje. Jedan je veliki kvadrat podijeljen na 25 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 16 malih kvadrata (slika 15-2); drugi je veliki kvadrat. Kvadratna mreža je podijeljena na 16 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 25 malih kvadrata. Međutim, bez obzira na vrstu ploče za brojanje, u svakom velikom kvadratu nalazi se 400 malih polja. Duljina stranice svakog velikog kvadrata je lmm, tada je površina svakog velikog kvadrata lmm2. Nakon što je pokrovno stakalce pokriveno, visina između pokrovnog stakalca i stakalca je 0,lmm, tako da je volumen komore za brojanje 0,lmm3 (jedan desettisućiti dio mililitra). Slika 15-1 Struktura ploče za brojanje krvnih stanica (1) Slika 15-2 Struktura ploče za brojanje krvnih stanica (2) A. Pogled sprijeda; B. Uzdužni presjek; povećana četvrtasta mreža, veliki kvadrat u sredini je komora za brojanje 1. Ploča za brojanje krvnih stanica; 2. Pokrovno stakalce; 3. Kada brojite u komori za brojanje, obično izbrojite ukupan broj bakterija u pet kvadrata, zatim pronađite prosječnu vrijednost svakog kvadrata, a zatim pomnožite s 25 ili 16 kako biste dobili Ukupan broj bakterija u velikom kvadratu se zatim pretvara u ukupan broj bakterija u 1 ml otopine bakterija. Pretpostavimo da je ukupan broj bakterija u pet srednjih kvadrata A, a faktor razrjeđenja bakterijske otopine B. Ako je to ploča za brojanje s 25 srednjih kvadrata, tada je ukupan broj bakterija u 1 mL bakterijske otopine {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (komada) Na isti način, ako je ploča za brojanje sa 16 kvadrata, ukupan broj bakterija u 1mL otopine bakterija {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (komadi),,
