Razlike između fluorescentne mikroskopije i konfokalne mikroskopije
fluorescentni mikroskop
1. Fluorescentni mikroskop koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti za ozračivanje objekta koji se pregledava, uzrokujući da emitira fluorescenciju, a zatim promatra oblik i položaj objekta ispod mikroskopa. Fluorescentna mikroskopija koristi se za proučavanje apsorpcije, transporta, distribucije i lokalizacije tvari unutar stanica. Neke tvari u stanicama, poput klorofila, mogu fluoressirati kada su izložene ultraljubičastom zračenju; Postoje i neke tvari koje ne mogu emitirati fluorescenciju, ali također mogu emitirati fluorescenciju ako su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijelima i ozračene ultraljubičastom svjetlošću. Fluorescentna mikroskopija jedno je od alata za kvalitativna i kvantitativna istraživanja takvih tvari.
2. Princip fluorescentnog mikroskopa:
(A) Izvor svjetlosti: Izvor svjetlosti emitira svjetlost različitih valnih duljina (od ultraljubičastog do infracrvenog).
(B) Izvor svjetlosti filtra pobuda: prijenos svjetla specifične valne duljine koja može uzrokovati fluorescenciju u uzorku, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za uzbudljivu fluorescenciju.
(C) Fluorescentni uzorci: obično obojeni fluorescentnim pigmentima.
(D) Blokiranje filtra: selektivno prenosi fluorescenciju blokiranjem pobuđenog svjetla koje uzorak ne apsorbira, a neke valne duljine u fluorescenciji se također selektivno prenose. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti kako bi osvijetljeni objekt emitirao fluorescenciju. Elektronski mikroskop prvi su sastavili Knorr i Haruska u Berlinu u Njemačkoj 1931. godine. Ovaj mikroskop koristi velike elektronske zrake umjesto svjetlosnih greda. Zbog mnogo kraće valne duljine protoka elektrona u usporedbi s laganim valovima, povećanje elektronskog mikroskopa može doseći 8 0 0000 puta, s minimalnom granicom razlučivosti od 0,2 nanometra. Skenirajući elektronski mikroskop, koji je prvi put korišten 1963. godine, omogućuje ljudima da vide sitne strukture na površini objekata.
3. Opseg aplikacije: Koristi se za povećanje slika malih objekata. Općenito se koristi za promatranje biologije, medicine, mikroskopskih čestica itd.
konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop dodaje polu reflektirajuću polovicu leće reflektiranom svjetlosnom putu, koji odbija reflektiranu svjetlost koja je prošla kroz leću u drugim smjerovima. U žarištu, nalazi se pregrada s rupom koja se nalazi na žarišnoj točki, a iza pregrade je fotomultiplikatnija cijev. Može se zamisliti da se reflektirana svjetlost prije i nakon otkrivanja svjetla fokus ne može usredotočiti na malu rupu kroz ovaj konfokalni sustav i da će ga blokirati pregrada. Dakle, fotometar mjeri reflektirani intenzitet svjetlosti na žarišnoj točki.
2. Princip: Tradicionalni optički mikroskopi koriste izvore svjetlosti polja, a na sliku svake točke na uzorku utječe difrakcija ili raspršena svjetlost iz susjednih točaka; Lasersko skeniranje konfokalnog mikroskopa koristi laserski snop za osvjetljavanje rupe i formiranje izvora svjetlosti točke za skeniranje svake točke na žarišnoj ravnini uzorka. Osvijetljena točka na uzorku zamišlja se na rupi za otkrivanje, a primljena je točka prema točki ili crtama pomoću cijevi za fotomultiplikaciju (PMT) ili uređajem za hladno spajanje (CCCD) nakon otkrivanja rupe, brzo formirajući fluorescentnu sliku na ekranu monitora računala. Osvjetljenje i rupu za otkrivanje konjugiranih u odnosu na žarišnu ravninu objektivne leće. Točke na žarišnoj ravnini istovremeno su usredotočene na rupu za osvjetljenje, a emisijski otvor, a točke izvan žarišne ravnine neće se zamisliti na rupi za otkrivanje. Rezultirajuća konfokalna slika je optički presjek uzorka, prevladavajući nedostatak zamagljenih slika u općim mikroskopima.
