Fluorescentni mikroskopi mogu se podijeliti u dvije vrste prema njihovom optičkom putu.
1. Transmisijski fluorescentni mikroskop: Ekscitacijski izvor svjetlosti koristi se za pobuđivanje fluorescencije prolaskom kroz materijal uzorka kroz kondenzorsku leću. Također se mogu koristiti uobičajeni koncentratori tamnog polja, a obični koncentratori mogu se koristiti za podešavanje reflektora za preusmjeravanje i bočno usmjeravanje pobudne svjetlosti na uzorak. Ovo je relativno staromodan-fluorescentni mikroskop. Prednost mu je jaka fluorescencija pri malom povećanju, a nedostatak mu je što mu fluorescencija opada s povećanjem. Stoga je bolji za promatranje materijala većih uzoraka.
2. Fluorescencijski mikroskop u padajućem svjetlu je nova vrsta fluorescentnog mikroskopa razvijena u moderno doba. Za razliku od gore navedenog, pobudna svjetlost pada s leće objektiva prema dolje na površinu uzorka, koristeći istu leću objektiva kao kondenzator za osvjetljavanje i leću objektiva za prikupljanje fluorescencije. Dvostruki razdjelnik snopa u boji treba dodati optičkom putu, koji je 45 stupnjeva udaljen od svjetlosnog urana. Kut, pobudna svjetlost se reflektira u leću objektiva i fokusira na uzorak. Fluorescencija koju stvara uzorak, kao i pobudna svjetlost reflektirana od površine leće objektiva i pokrovnog stakla, ulaze u leću objektiva i vraćaju se u dvobojni razdjelnik snopa, odvajajući pobudnu svjetlost i fluorescenciju. Preostalo pobudno svjetlo tada apsorbira blokirajući filtar. Ako se koriste različite kombinacije filtara pobude/dvobojnih separatora snopa/filtara za blokiranje, oni mogu zadovoljiti potrebe različitih fluorescentnih reakcijskih proizvoda. Prednosti ovog fluorescentnog mikroskopa su ravnomjerno osvjetljenje polja, jasna slika i jača fluorescencija s većim povećanjem.
(2) Upute za korištenje fluorescentnog mikroskopa.
1. Uključite izvor svjetla, ultra-živinu žarulju potrebno je prethodno zagrijati nekoliko minuta kako bi dosegla svijetlu točku.
2. Transmisijska fluorescentna mikroskopija zahtijeva ugradnju potrebnog pobudnog filtra između izvora svjetiljke i kondenzatora, te odgovarajućeg blokirajućeg filtra iza leće objektiva. Fluorescencijski mikroskop padajućeg svjetla treba umetnuti potrebni filtar za pobudu/dvostruki razdjelnik zrake u boji/blok filtara za blokiranje u utor optičkog puta.
3. Promatrajte mikroskopom-niske snage i namjestite središte izvora svjetlosti prema uređaju za podešavanje različitih vrsta fluorescentnih mikroskopa, tako da se nalazi u središtu cijele točke osvjetljenja.
4. Postavite uzorak i fokusirajte ga za promatranje. Treba obratiti pozornost tijekom uporabe: Nemojte promatrati izravno očima prije postavljanja filtra kako biste izbjegli oštećenje očiju; Kada se uzorci promatraju uljnim mikroskopom, mora se koristiti poseban nefluorescentni uljni mikroskop; Nakon što se visokotlačna -živina lampa isključi, ne može se odmah ponovno uključiti. Za ponovno pokretanje potrebno je 5 minuta, inače će biti nestabilno i utjecati na životni vijek živine žarulje.
(3) Promatranjem pod fluorescentnim mikroskopom na platformi za podučavanje pomoću plavoljubičastog svjetlosnog filtera, mogu se vidjeti stanice obojene 0,01% akridin narančaste fluorescentne boje. Jezgra i citoplazma su pobuđeni da proizvode dvije različite boje fluorescencije (tamnozelenu i narančastocrvenu).
