Fluorescentni mikroskopi mogu se podijeliti u dvije vrste prema principu puta svjetlosti:
1. Transmisijski fluorescentni mikroskop
U starijim fluorescentnim mikroskopima, pobudni izvor svjetlosti prolazi kroz materijal uzorka kroz kondenzator kako bi pobudio fluorescenciju. Prednost je što je fluorescencija jaka pri malom povećanju, ali nedostatak je što fluorescencija slabi kako se povećanje povećava. Stoga je prikladan samo za promatranje materijala većih uzoraka.
2.Epifluorescentna mikroskopija
Ekscitacijsko svjetlo pada s leće objektiva na površinu uzorka, tj. ista leća objektiva koristi se kao kondenzor osvjetljenja i leća objektiva za prikupljanje fluorescencije.
Optičkom putu je potrebno dodati dikroični razdjelnik snopa (dikroično zrcalo) koji je pod kutom od 45o u odnosu na optičku os. Pobuđeno svjetlo se reflektira u leću objektiva i koncentrira na uzorak. Fluorescencija koju stvara uzorak odbija se od površine leće objektiva i poklopca. Ekscitacijsko svjetlo reflektirano na površini predmetnog stakla istovremeno ulazi u leću objektiva i vraća se u dikroični razdjelnik snopa kako bi se odvojilo ekscitacijsko svjetlo i fluorescencija. Preostalo pobudno svjetlo tada apsorbira filter za blokiranje. Ako koristite različite kombinirane umetke filtra za pobuđivanje/dvobojnog razdjelnika zrake/filtara za blokiranje, možete zadovoljiti potrebe za različitim produktima reakcije fluorescencije.
Prednost ovakvog fluorescentnog mikroskopa je što je vidno polje ravnomjerno osvijetljeno, slika je jasna, a što je veće povećanje, to je fluorescencija jača.
Koje su glavne kategorije optičkih mikroskopa?
1. Obični optički mikroskop
Obični optički mikroskopi uglavnom se sastoje od sljedećih dijelova: sustav osvjetljenja, koji uključuje izvor svjetlosti i kondenzator; sustav optičkog povećanja, koji se sastoji od leće objektiva i okulara. To je najkritičniji dio mikroskopa i dizajniran je za izbjegavanje pretjerane sferne i kromatske aberacije, i okular i leća objektiva sastavljeni su od složenih skupina leća.
2. Laserski konfokalni skenirajući mikroskop
Laserski konfokalni skenirajući mikroskop zvuči vrlo visoko i komplicirano. Zapravo, jednostavno koristi laser kao izvor svjetlosti za skeniranje za brzo skeniranje i slikanje objekata točku po točku, liniju po liniju i površinu po površinu.
S obzirom na kraću valnu duljinu laserske zrake, sama zraka je vrlo tanka, što određuje da konfokalni laserski skenirajući mikroskop ima visoku rezoluciju, koja je oko tri puta veća od običnog optičkog mikroskopa. Ova vrsta mikroskopa koristi se za promatranje stanične morfologije i kvantitativnu analizu unutarstaničnih biokemijskih komponenti i mjerenje stanične morfologije.
3. Mikroskop tamnog polja
U središtu kondenzatora tamnopoljskog mikroskopa nalazi se svjetlosna ploča koja sprječava izravan ulazak svjetlosti osvjetljenja u leću objektiva. Samo svjetlost koju reflektira i difragira uzorak može ući u leću objektiva. Stoga je pozadina vidnog polja crna, a rubovi objekata svijetli.
