Vještine i metode fluorescentne mikroskopije
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa 1. Širokokutni okular 2. Akromatska leća objektiva 3. Konvertor objektiva s četiri rupe 4. Epi-fluorescentni uređaj Plavi (B) Zeleni (G) sustav pobude 100W živina lampa 5. Koaksijalni grubi i fini mehanizam za podešavanje fokusa: Podešavanje Raspon fokusa: 15 mm Vrijednost mreže mikro pomaka: 0,002 mm 6. Dvoslojni mehanički stol Uzdužni raspon pomicanja: 70 mm Raspon bočnog pomicanja: 50 mm
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa
1. Širokokutni okular
2. Akromatska leća objektiva
3. Nastavak za nos s četiri otvora
4. Epi-fluorescentni uređaj plavi (B) zeleni (G) sustav pobude 100W živina lampa
5. Koaksijalni grubi i fini mehanizam za podešavanje fokusa: raspon fokusa 15 mm fino pomicanje mrežne vrijednosti 0.002 mm
6. Dvoslojni mehanički radni stol
Raspon vertikalnog pomicanja: 70 mm Raspon bočnog pomicanja: 50 mm
Vještine i metode fluorescentne mikroskopije
(1) Staklo
Debljina predmetnog stakla trebala bi biti između 0,8 i 1,2 mm. Predebelo stakalce će s jedne strane apsorbirati više svjetla, a s druge strane, ekscitacijsko svjetlo se ne može koncentrirati na preparat. Stakalca moraju biti glatka, ujednačene debljine i bez očigledne autofluorescencije. Ponekad se koriste stakalci od kvarcnog stakla.
(2) Pokrovno staklo
Debljina pokrovnog stakla je oko 0,17 mm, glatko. Kako bi se pojačala pobudna svjetlost, može se koristiti i interferencijsko pokrovno staklo, posebno pokrovno staklo presvučeno s nekoliko slojeva tvari (kao što je magnezijev fluorid) koje imaju različite interferencijske učinke na svjetlost različitih valnih duljina, što može učiniti fluorescencija ide glatko. Uzbudljivo svjetlo prolazi i reflektira se, a to reflektirano pobudno svjetlo pobuđuje uzorak.
(3) Uzorak
Kriške tkiva ili drugi uzorci ne smiju biti predebeli. Ako je predebeo, najveći dio pobudne svjetlosti potrošit će se u donjem dijelu uzorka, dok gornji dio koji izravno promatra leća objektiva neće biti u potpunosti pobuđen. Osim toga, preklapanje ćelija ili nečistoća utječu na prosudbu.
(4) Sredstvo za montažu
Glicerin se obično koristi kao sredstvo za montiranje, koje ne smije imati autofluorescenciju, bezbojno i prozirno, a svjetlina fluorescencije je svjetlija pri pH 8.5-9.5, i nije lako brzo izblijediti. Stoga se jednaka mješavina glicerola i 0.5mol/l otopine karbonatnog pufera s pH od 90 do 9,5 obično koristi kao sredstvo za montiranje.
(5) ulje za ogledalo
Općenito, pri promatranju uzoraka s fluorescentnim mikroskopima tamnog polja i uljnim imerzijskim lećama, mora se koristiti imerzijsko ulje. Najbolje je koristiti specijalno nefluorescentno ulje za uranjanje. Umjesto njega može se koristiti i gore navedeni glicerin, a može se koristiti i tekući parafin, ali je indeks loma nizak, što malo utječe na kvalitetu slike. Utjecaj.
