Jeste li ikada razumjeli osnovne principe fazno kontrastne mikroskopije?
Fazno-kontrastni mikroskop izumio je nizozemski znanstvenik Zernike 1935. za promatranje neobojanih uzoraka. Za žive stanice i neobojene biološke uzorke, zbog razlike u indeksu loma i debljini mikrostrukture svakog dijela stanice, kada svjetlosni val prolazi, valna duljina i amplituda se ne mijenjaju, mijenja se samo faza (razlika amplitude ), koji je nevidljiv ljudskom oku. promatrati. Mikroskop s faznim kontrastom mijenja faznu razliku i koristi difrakciju svjetlosti i fenomen interferencije za promjenu fazne razlike u razliku amplitude za promatranje živih stanica i neobojanih uzoraka. Razlika između fazno kontrastnog mikroskopa i običnog mikroskopa je u tome što se umjesto promjenjive dijafragme koristi prstenasta dijafragma, umjesto obične objektivne leće objektiv s faznom pločom, a predviđen je teleskop za koaksijalnost.
Osnovni principi fazno kontrastne mikroskopije:
Koristeći razliku u indeksu loma i debljini između različitih strukturnih komponenti predmeta, optička razlika putanja koja prolazi kroz različite dijelove objekta pretvara se u razliku u amplitudi (intenzitetu svjetlosti), a kroz sabirnu leću s prstenastom dijafragmom i fazna razlika s faznom pločom Leća objektiva ostvaruje promatrački mikroskop. Uglavnom se koristi za promatranje živih stanica ili neobojanih dijelova tkiva, a ponekad se također može koristiti za promatranje obojenih uzoraka kojima nedostaje kontrast.
Optička razlika putanje vidljive svjetlosti koja prolazi kroz uzorak mijenja se u razliku amplitude, čime se poboljšava kontrast između različitih struktura i čine različite strukture jasno vidljivima. Svjetlost se lomi nakon prolaska kroz uzorak, odstupa od izvorne optičke putanje i kasni za 1/4λ (valna duljina). Ako se poveća ili smanji za 1/4λ, optička razlika putanje postaje 1/2λ, a dvije zrake interferiraju nakon svjetlosne osi. Pojačajte, povećajte ili smanjite amplitudu, poboljšajte kontrast.
Mikroskop s faznim kontrastom ima dvije funkcije koje drugi mikroskopi nemaju: ① odvaja izravnu svjetlost (pozadinsko svjetlo u vidnom polju) od svjetlosti koju odbija objekt; ② uklanja oko polovicu valne duljine iz faze tako da ne može djelovati, što rezultira promjenom intenziteta.
