Poboljšane prednosti laserske skenirajuće višefotonske mikroskopije
Laserska skenirajuća višefotonska mikroskopija je veliko poboljšanje optičke mikroskopije, uglavnom za promatranje duboke strukture živih stanica, fiksnih stanica i tkiva, i može dobiti jasne i oštre višeslojne strukture Z-ravnine, to jest, optičke rezove, i može konstruirati Trodimenzionalna čvrsta struktura uzorka. Konfokalni mikroskop koristi laserski izvor svjetlosti, koji je proširen da ispuni cijelu stražnju žarišnu ravninu leće objektiva, a zatim konvergira u vrlo malu točku na žarišnoj ravnini uzorka kroz sustav leća objektiva. Ovisno o numeričkoj aperturi leće objektiva, promjer najsvjetlije točke osvjetljenja je oko 0.25 ~ 0.8 μm, a dubina je oko 0.5 ~ 1.5 μm. Veličina konfokalne točke ovisi o dizajnu mikroskopa, valnoj duljini lasera, karakteristikama leće objektiva, postavkama stanja jedinice za skeniranje i prirodi uzorka. Terenski mikroskopi imaju veliki raspon osvjetljenja i veliku dubinu osvjetljenja, dok konfokalni mikroskopi imaju osvjetljenje koje je koncentrirano u žarišnoj točki na žarišnoj ravnini. Najosnovnija prednost konfokalne mikroskopije je da može izvesti fino optičko rezanje debelih fluorescentnih uzoraka (do 50 μm ili više), s debljinom od oko 0,5 do 1,5 μm. Niz slika optičkih presjeka može se dobiti pomicanjem uzorka gore-dolje koračnim motorom Z-osi mikroskopa. Prikupljanje informacija o slici kontrolira se unutar ravnine i neće biti ometano signalima s drugih mjesta na uzorku. Nakon uklanjanja učinka pozadinske fluorescencije i povećanja omjera signala i šuma, kontrast i razlučivost konfokalnih slika značajno su poboljšani u usporedbi s tradicionalnim fluorescentnim slikama osvjetljenja polja. U mnogim su uzorcima mnoge zamršene strukturne komponente isprepletene kako bi tvorile složene sustave, ali kada se prikupi dovoljno optičkih presjeka, možemo ih rekonstruirati u 3D pomoću softvera. Ovaj eksperimentalni pristup naširoko se koristi u biološkim istraživanjima kako bi se razjasnili složeni strukturni i funkcionalni odnosi između stanica ili tkiva.
