Uvod u prednosti i nedostatke višefotonskih laserskih skenirajućih mikroskopa
Prednosti višefotonskog laserskog skenirajućeg mikroskopa:
1. Pobuđeno crvenom ili infracrvenom svjetlošću, raspršenje svjetlosti je malo, a raspršenje malih čestica obrnuto je proporcionalno četvrtoj potenciji valne duljine.
2. Više raspršenih fotona iz poprečnog-presjeka slike može se prikupiti bez potrebe za rupicama.
3. Rupice ne mogu razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranih ili žarišnih područja, a multifotoni imaju bolji omjer signala-i-šuma u dubokoj slici.
4. Uzorak lako apsorbira i prigušuje ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za pobuđivanje jednog fotona prije nego što zraka dosegne žarišnu ravninu, što otežava pobuđivanje dubokih slojeva.
5. Što se tiče promatranja biološkom mikroskopijom, prvo što treba uzeti u obzir je ne oštetiti aktivno stanje samog organizma, održati cirkulaciju vode, koncentraciju iona, kisika i hranjivih tvari. U području promatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar doze zračenja i svjetlosne energije koja ne oštećuje stanice.
6. Višefotonska mikroskopija ima mnoge prednosti. U pogledu tro-dimenzionalne rezolucije, dubinske invazije, učinkovitosti raspršenja, pozadinskog svjetla, omjera-na-šum, kontrole, itd., postoje karakteristike koje prijašnji laserski mikroskopi ne posjeduju ili ne mogu nadmašiti
Nedostaci višefotonskog laserskog skenirajućeg mikroskopa:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak sadrži kromofore koji mogu apsorbirati pobudno svjetlo, uzorak može biti izložen toplinskom oštećenju.
3. Razlučivost je malo smanjena, iako se može poboljšati istodobnim korištenjem konfokalnih malih rupa, postoji gubitak signala.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
