Upoznavanje s prednostima i nedostacima višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije
1. Koristeći crveno svjetlo ili infracrveno svjetlo za pobuđivanje, raspršenje svjetlosti je malo, a raspršenje malih čestica obrnuto je proporcionalno četvrtoj potenciji valne duljine.
2. Više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike može se prikupiti bez potrebe za rupicama.
3. Rupica ne može razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranog područja ili područja fokusa, a omjer signala i šuma višefotonske slike u dubokim slojevima je dobar.
4. Uzorak lako apsorbira i prigušuje ultraljubičastu ili vidljivu svjetlost koja se koristi za pobuđivanje jednim fotonom prije nego što zraka dosegne žarišnu ravninu i teško je pobuditi duboke slojeve.
5. Što se tiče promatranja biološkim mikroskopom, prvo što treba uzeti u obzir je ne oštetiti aktivno stanje samog organizma i održati protok vode, koncentraciju iona, kisika i hranjivih tvari. U slučaju promatranja svjetla, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar količine zračenja i svjetlosne energije kako se stanice ne bi oštetile.
6. Višefotonska mikroskopija ima mnoge prednosti. Kao što su trodimenzionalna rezolucija, dubinsko prodiranje, učinkovitost raspršenja, pozadinsko svjetlo, omjer signala i šuma, kontrola itd., svi imaju karakteristike koje prijašnji laserski mikroskopi nisu imali ili se s njima nisu mogli usporediti.
Nedostaci višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije:
1. Može prikazati samo fluorescenciju.
2. Ako uzorak sadrži kromofore koji apsorbiraju pobudno svjetlo, uzorak može biti termički oštećen.
3. Razlučivost je malo smanjena. Iako se može poboljšati korištenjem konfokalnih rupa u isto vrijeme, dolazi do gubitka signala.
4. Ograničeni skupim ultrabrzim laserima, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
