Uvod u poboljšane prednosti laserskog skeniranja multifoton mikroskopije
Lasersko skeniranje multifotonskog mikroskopa značajno je poboljšanje optičke mikroskopije, uglavnom očitovanja u sposobnosti promatranja dubokih struktura živih stanica, fiksnih stanica i tkiva, te dobivanje jasnih i oštrih višeslojnih struktura Z-ravnine, naime optičkih kriški, koje se mogu koristiti za konstrukciju trodimenzionalnih čvrstih struktura. Konfokalni mikroskop koristi laserski izvor svjetlosti, koji se proširuje kako bi ispunio cijelu žarišnu ravninu objektivne leće, a zatim se konvergirao u vrlo male točke na žarišnoj ravnini uzorka kroz sustav objektiva objektivne leće. Prema numeričkom otvoru objektivne leće, promjer točke svijetle osvjetljenja iznosi oko 0. 25-0. 8 µm, a dubina je oko 0. 5-1. 5 µ m. Veličina konfokalne točke određuje se dizajnom mikroskopa, laserskom valnom duljinom, objektivnim karakteristikama, postavkama stanja jedinice skeniranja i svojstvima uzoraka. Raspon osvjetljenja i dubina poljskog mikroskopa su veliki, dok je osvjetljenje konfokalnog mikroskopa usredotočeno na žarišnu točku na žarišnoj ravnini. Osnovna prednost konfokalne mikroskopije je u tome što može izvesti fino optičko presjek na debelim fluorescentnim uzorcima (do 5 {0 µm ili više), debljine od približno 0,5 do 1,5 µm. Serija slika optičkih kriški može se dobiti pomicanjem uzorka prema gore i dolje pomoću stepper motora Z-osi mikroskopa. Prikupljanje podataka o slici kontrolira se unutar ravnine * *, bez smetnji iz signala koji se emitiraju iz drugih položaja na uzorku. Nakon uklanjanja utjecaja pozadinske fluorescencije i povećanja omjera signal-šum, kontrast i razlučivost konfokalnih slika značajno su poboljšani u usporedbi s tradicionalnim slikama fluorescencije na terenu. U mnogim uzorcima zamršene strukturne komponente prepliću se kako bi formirale složene sustave, ali jednom kad se mogu prikupiti dovoljno optičkih odjeljaka, softver možemo koristiti za rekonstruiranje u tri dimenzije. Ova se eksperimentalna metoda široko koristi u biološkim istraživanjima kako bi se rasvijetlili složeni strukturni i funkcionalni odnosi između stanica ili tkiva.
