Mjerenje mikrobne količine - mikroskopska metoda izravnog brojanja!
Rast bakterijske populacije karakterizira povećanje broja stanica ili povećanje staničnog materijala. Postoji nekoliko metoda za mjerenje broja stanica, uključujući izravno mikroskopsko brojanje, brojanje na ploči, turbometriju spektrofotometrom, najvjerojatniji broj MPN i membransku filtraciju. Metode mjerenja stanične tvari uključuju mjerenje suhe mase stanica, mjerenje sadržaja pojedinih komponenti stanica kao što su dušik, RNA i DNA, te mjerenje produkata metabolizma. Ukratko, postoje mnoge metode za mjerenje rasta mikroba, svaka sa svojim prednostima i nedostacima, a odabir bi se trebao temeljiti na specifičnim zahtjevima u radu. Ovaj eksperiment uglavnom uvodi često korištenu metodu izravnog brojanja mikroskopa u proizvodnji i znanstveno-istraživačkom radu.
Zahtjevi namjene
1. Pojasnite princip korištenja ploče za brojanje krvnih stanica za brojanje.
2. Ovladati metodom korištenja ploče za brojanje krvnih stanica za brojanje mikroba.
2, Osnovna načela
Metoda mikroskopskog izravnog brojanja jednostavna je, brza i intuitivna metoda izravnog brojanja male količine suspenzije uzorka pod mikroskopom stavljanjem na posebno predmetno stakalce određene površine i volumena (poznato i kao brojač bakterija). Trenutno, uobičajeno korišteni uređaji za brojanje bakterija u zemlji i inozemstvu uključuju ploče za brojanje krvnih stanica, Peteroff Hauser uređaje za brojanje bakterija i Hawksley uređaje za brojanje bakterija, koji se svi mogu koristiti za brojanje suspenzija kvasca, bakterija, gljivičnih spora itd., s istim osnovnim principom. Posljednje dvije vrste brojača bakterija imaju ukupni volumen od {{0}}.02 mm3 nakon što su prekrivene pokrovnim staklom, a udaljenost između pokrovnog stakla i nosača predmetnog stakla je samo 0,02 mm. Stoga se objektiv za uranjanje u ulje može koristiti za promatranje i brojanje manjih stanica poput bakterija. Uz korištenje ovih brojača bakterija, postoji i metoda procjene za izravno promatranje omjera površine razmaza i površine polja pod mikroskopom, koja se općenito koristi za bakteriološko ispitivanje mlijeka. Prednosti izravnog brojanja mikroskopom su intuitivna, brza i jednostavna za rukovanje. No, nedostatak ove metode je što su izmjereni rezultati obično zbroj mrtvih i živih stanica. Trenutačno postoje neke metode koje mogu prevladati ovaj nedostatak, kao što je kombiniranje komorne kulture bojenja živih stanica (kratko vrijeme) i dodavanje inhibitora stanične diobe kako bi se postigao cilj brojanja samo živih stanica.
Korištenje ploče za brojanje krvnih stanica kao primjera za izravno brojanje pod mikroskopom. Načini uporabe druga dva brojača bakterija nalaze se u uputama raznih proizvođača. Izravno brojanje pod mikroskopom pomoću ploče za brojanje krvnih stanica često je korištena metoda za brojanje mikroba. Ploča za brojanje je posebno izrađen stakleni tobogan s četiri utora koji na njemu tvore tri platforme; Šira platforma u sredini podijeljena je na dvije polovice kratkim horizontalnim žlijebom, a sa svake strane platforme nalazi se rešetka. Svaka mreža je podijeljena na devet velikih mreža, a velika mreža u sredini je soba za brojanje. Struktura ploče za brojanje krvnih stanica prikazana je na slici l{{0}}. Vaga u sobi za brojanje općenito ima dvije specifikacije. Jedan je da je veliki kvadrat podijeljen na 25 srednjih kvadrata, a svaki kvadrat je dalje podijeljen na 16 malih kvadrata (slika 15-2); Druga metoda je da veliki kvadrat podijelite na 16 srednjih kvadrata, a svaki kvadrat dalje podijelite na 25 malih kvadrata. Međutim, bez obzira na veličinu ploče za brojanje, u svakom velikom kvadratu nalazi se 400 malih polja. Ako je duljina stranice svakog kvadrata 1 mm, površina svakog velikog kvadrata je lmm2. Nakon prekrivanja pokrovnim staklom, visina između pokrovnog stakla i stakalca je 0,1 mm, tako da je volumen sobe za brojanje 0,1 mm3 (tisućinka mililitra). Slika 15-1 Struktura ploče za brojanje krvnih stanica (I) Slika 15-2 Struktura ploče za brojanje krvnih stanica (II) A Pogled sprijeda; B. Vertikalni presjek; Povećana mreža ima veliki kvadrat u sredini kao prostoriju za brojanje 1. Ploča za brojanje krvnih stanica; 2. Pokrovno staklo; Kada se broji u prostoriji za brojanje, ukupni broj bakterija obično se izračunava za pet kvadrata, zatim se dobije prosječna vrijednost svakog kvadrata, pomnožena s 25 ili 16 kako bi se dobio ukupni broj bakterija u velikom kvadratu, koji se zatim pretvara u ukupni broj bakterija u lml otopine bakterija. Pretpostavljajući da je ukupni broj bakterija u pet kvadratnih mreža A, a faktor razrjeđenja bakterijske otopine B. Ako postoji 25 ploča za brojanje u kvadratnoj mreži, ukupni broj bakterija u 1 mL bakterijske otopine je A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Slično tome, ako postoji 16 ploča za brojanje u kvadratnoj mreži, ukupni broj bakterija u 1 mL bakterijske otopine je A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
