Učionica za mikroskopske slike 丨Fluorescencijski mikroskop širokog polja
U aplikacijama za snimanje živih stanica, širokopoljna fluorescentna mikroskopija olakšava promatranje dinamike adherentnih stanica koje rastu u posebnim komorama okruženja postavljenim na postolje mikroskopa. U svojoj najosnovnijoj konfiguraciji, standardni obrnuti mikroskop za kulturu tkiva opremljen EPI fluorescentnim osvjetljenjem povezan je sa sustavom detektora područja (obično CCD kamera), odgovarajućim fluorescentnim filtrima i sustavom zatvarača za ograničavanje prekomjerne izloženosti stanica štetnom pobudnom svjetlu . Osnovna fluorescentna mikroskopija oslanja se na pažljivo usklađene interferencijske filtre za odabir specifičnih širina pojasa za osvjetljavanje i detekciju emitiranog svjetla. Izvori svjetlosti uključuju živine, ksenonske i metalne halogene lučne žarulje, laserske sustave za širenje snopa i diode koje emitiraju svjetlost (LED), a sve zahtijevaju različite specifikacije filtera. Sintetski fluorofori koji se koriste u fluorescentnoj mikroskopiji imaju spektre emisije koji pokrivaju blisko ultraljubičasto, vidljivo i blisko infracrveno područje. Korištenje genetski kodiranih fluorescentnih proteina uvelike je proširilo mogućnosti fluorescentne mikroskopije u slikanju živih stanica, omogućujući istraživačima da precizno ciljaju podstanične regije od interesa.
Nuohai LS 18, nova vrsta svjetlosnog iluminacijskog mikroskopa koji je neovisno razvio Nuohai, posebno je dizajniran za 3D snimanje visoke razlučivosti prozirnih velikih uzoraka tkiva i posvećen je istraživanju različitih intaktnih tkiva kao što su mozak, slezena, tanko crijevo , bubrega, pluća, srca i tumora. 3D precizna struktura organa.
Kod fluorescencije širokog polja, emisija punog otvora blende prikupljena objektivom mikroskopa maksimizira snimljeni signal dok minimalizira potrebno vrijeme ekspozicije. Stoga se uzorci mogu slikati s vrlo kratkim svjetlosnim razdobljima. Glavni nedostatak snimanja širokog polja je to što je fluorescencija iz područja udaljenih od žarišne ravnine, kao i pozadinski signal, neželjena svjetlost koja često zaklanja značajke od interesa. Stoga snimanje širokog polja daje najbolje rezultate kada su značajke od interesa velike (kao što su organele) ili izrazito točkaste prirode. Širok izbor uzoraka živih stanica, uključujući prianjajuće stanice, bakterije, kvasce i vrlo tanke dijelove tkiva, idealni su kandidati za fluorescentno oslikavanje širokog polja, međutim, deblja tkiva (preko 5 mikrona) najbolje se koriste s naprednijom metodom snimanja.
Iako je došlo do mnogo napretka u fluorescentnom oslikavanju sa sintetskim fluorescentnim bojama, kvantnim točkama i fluorescentnim proteinima, u nekim je slučajevima korisno kombinirati fluorescenciju s drugim modalitetima oslikavanja. Kao primjer, DIC se može koristiti u kombinaciji s fluorescencijom širokog polja za praćenje vitalnosti stanica i opće morfologije dok se proučavaju fenomeni od interesa za specifične označene mete. Snimanje DIC-a i fluorescencije na jednoj slici obično je nepraktično, ali u ispravno konfiguriranom mikroskopu te se dvije tehnike mogu koristiti uzastopno. Stoga, nakon snimanja u epifluorescentnom modu, DIC slike mogu se dobiti iz fluorescentno obilježenih uzoraka korištenjem propuštenog svjetla. Dvije slike mogu se spojiti tijekom naknadne analize. Simultano dobivanje DIC i fluorescentnih slika moguće je u naprednim konfiguracijama mikroskopa širokog polja pomoću spektralno odvojene rasvjete (kao što je vidljivo i blisko infracrveno) i adaptera za dvostruku kameru ili kameru s podijeljenim pogledom. U većini konfokalnih mikroskopa s laserskim skeniranjem slike se mogu dobiti u fluorescentnom i DIC načinu rada istovremeno, čime se eliminira potreba za naknadnom obradom. Fazni kontrast i Hoffmanov modulacijski kontrast također se mogu koristiti u kombinaciji s fluorescentnom mikroskopijom širokog polja. Međutim, u ovim tehnikama leća objektiva je posebna, bez obzira radi li se o faznom prstenu ili Hoffmanovoj modulacijskoj ploči, uzrokovat će gubitak intenziteta emisije od 5-15 posto.
Poveznica na članak: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
