Priprema i promatranje bioloških uzoraka za elektronsku mikroskopiju
Razlučivost mikroskopa ovisi o valnoj duljini korištenog svjetla, elektronski mikroskop se počeo pojavljivati 1933. godine zbog korištenja mnogo kraće valne duljine od vidljive svjetlosti elektronskog snopa kao izvora svjetlosti, tako da je razlučivost može postići od optičkog mikroskopa znatno poboljšan. Različiti izvori svjetlosti također određuju niz razlika između elektronskog mikroskopa i optičkog mikroskopa.
U skladu s razlikama u principu snimanja elektronskog snopa i ulozi uzorka na različitim načinima, moderni elektronski mikroskop je razvijen da formira niz vrsta, trenutno * obično se koriste prijenosni elektronski mikroskop i skenirajući elektronski mikroskopa, prvi može biti u rasponu od 1,000-1,000,000 puta ukupnog povećanja raspona promjena, drugi može biti u ukupnom povećanju { {4}},000 puta ukupno povećanje promjena između. Ovaj eksperiment usmjeren je na pripremu uzoraka za dvije vrste mikroskopa, transmisijski elektronski mikroskop i skenirajući elektronski mikroskop.
Materijali
1. Soj Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) nagnut.
2. Otopine ili reagensi Amil acetat, koncentrirana sumporna kiselina, bezvodni etanol, sterilna voda, 2% natrijeva fosfovolframova kiselina (pH 6.5-8.0) vodena otopina, 0.3% otopina polivinil formaldehida (otopljenog u triklorometanu), citokroma c, amonijevog acetata, plazmida pBR322.
3. Instrumenti ili drugi pribor Obični optički mikroskop, bakrena mrežica, porculanski lijevak, čaša, ravna posuda, sterilna bireta, sterilna pinceta, lanceta, stakalca, ** ploča za brojanje, aparat za vakuumsko oblaganje, sušilica za kritične točke i tako dalje.
Radni koraci
(I) Priprema uzorka i promatranje transmisijske elektronske mikroskopije
1. Obrada metalne mreže
Uzorci za optičku mikroskopiju stavljaju se na stakalce radi promatranja. Međutim, u transmisijskoj elektronskoj mikroskopiji, budući da elektroni ne mogu prodrijeti kroz staklenu ploču, samo se mrežasti materijal može koristiti kao nosač, koji se obično naziva nosiva mreža. Noseća mreža može se podijeliti u mnogo različitih specifikacija zbog različitih materijala i oblika, od kojih se * obično koristi 200-400 mreža (broj rupa) bakrena mreža. Bakrenu mrežicu treba tretirati prije upotrebe kako bi se uklonila prljavština na njoj i održala čistom, inače će to utjecati na kvalitetu pratećeg filma i jasnoću fotografija uzoraka. Bakrena mrežica korištena u ovom eksperimentu je 400 mesh, koja se može tretirati na sljedeći način: prvo je izbjeljivati amil acetatom nekoliko sati, zatim ispirati destiliranom vodom nekoliko puta, a zatim izbjeljivati u bezvodnom etanolu dehidracija. Ako bakrena mrežica gore navedenom metodom još uvijek nije čista, može se koristiti za razrjeđivanje koncentrirane sumporne kiseline (1:1) uronjene u 1 ~ 2 minute ili u 1% otopini NaOH kuhane nekoliko minuta, nekoliko puta isprane destiliranom vodom , stavljen u dehidraciju bezvodnog etanola, koji se koristi.
2. Priprema potpornog filma
U promatranju uzoraka, mreža nosača također treba biti prekrivena slojem nestrukturiranog, jednolikog filma, inače će mali uzorci iscuriti iz rupa u mreži nosača, ovaj sloj filma obično se naziva potporni film ili noseći film. Noseći film trebao bi biti proziran za elektrone, a njegova debljina općenito bi trebala biti manja od 20 nm; pod utjecajem elektronskog snopa, film također treba imati određeni stupanj mehaničke čvrstoće, može održati stabilnost strukture i ima dobru toplinsku vodljivost; osim toga, potporna mreža ne bi trebala imati vidljivu strukturu pod elektronskim mikroskopom, i ne bi trebala imati kemijsku reakciju s uzorkom koji se nosi, i ne bi ometala promatranje uzorka, a njena debljina je općenito oko 15 nm. Folija za potporu može biti izrađena od plastične folije (npr. vatrootporne pamučne folije, polietilen formaldehidne folije, itd.), karbonske folije ili metalne folije (npr. berilijske folije, itd.). Pod rutinskim radnim uvjetima, zahtjevi se mogu ispuniti s plastičnom folijom, dok je priprema plastične folije u pamučnom ljepljivom filmu relativno laka, ali čvrstoća nije tako jaka kao polietilen formaldehidna folija.
