Principi, karakteristike i uporaba fluorescentne mikroskopije
Princip i strukturne karakteristike fluorescentnog mikroskopa: fluorescentni mikroskop koristi točkasti izvor svjetlosti visoke svjetlosne učinkovitosti, koji emitira određenu valnu duljinu svjetlosti (kao što je ultraljubičasto svjetlo 3650 in ili ultraljubičasto plavo svjetlo 4200 in) kroz sustav filtriranja boja kao pobudno svjetlo. Fluorescentna tvar u uzorku se pobuđuje da emitira različite boje fluorescencije, a zatim se promatra kroz povećanje objektiva i okulara. Na taj način, čak i sa slabom fluorescencijom, lako je prepoznatljiv i vrlo osjetljiv pod jakim kontrastnim pozadinama, uglavnom se koristi za proučavanje stanične strukture i funkcije, kao i kemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa i nekih dodataka (kao što je fluorescentni izvor svjetlosti, pobudni filtar, bikromatski separator snopa i blokirajući filtar itd.). Fluorescentni izvori svjetlosti - obično koriste živine žarulje ultravisokog tlaka (50-200W), koje mogu emitirati svjetlost različitih valnih duljina. Međutim, svaka fluorescentna tvar ima valnu duljinu pobudne svjetlosti koja proizvodi najjaču fluorescenciju, pa je potrebno dodati pobudne filtre (obično ultraljubičaste, ljubičaste, plave i zelene pobudne filtre) kako bi se dopustilo da samo određena valna duljina pobudne svjetlosti prođe i osvijetli uzorak, dok apsorbira svu ostalu svjetlost. Nakon zračenja pobuđenom svjetlošću, svaka tvar emitira vidljivu fluorescenciju s dužom valnom duljinom od zračenja u vrlo kratkom vremenskom razdoblju. Fluorescencija je specifična i općenito je slabija od ekscitacijske svjetlosti. Kako bi se promatrala specifična fluorescencija, potrebno je dodati filter za blokiranje (ili suzbijanje) iza leće objektiva.
Ima dvije funkcije: prvo, apsorbira i blokira pobudno svjetlo da uđe u okular kako bi se izbjeglo ometanje fluorescencije i oštećenje očiju; drugo, odabire i dopušta da određena fluorescencija prođe, prikazujući određenu boju fluorescencije. Obje vrste filtara moraju biti odabrane za korištenje zajedno.
