Zahtjevi za pripremu rutinskih uzoraka za mikroskopiranje
Konfokalni mikroskop je epohalni visokotehnološki novi proizvod razvijen 1980-ih, a danas je jedan od važnih analitičkih instrumenata u molekularnoj biologiji i znanosti o životu. Konfokalna mikroskopija temelji se na slikanju fluorescentnim mikroskopom s dodanim uređajem za lasersko skeniranje, korištenjem računala za obradu slike za dobivanje fluorescentnih slika mikrostrukture unutar stanica ili tkiva te za promatranje promjena u morfologiji mnogih fizioloških signalnih strojeva na substaničnoj razini. Postanite moćan istraživački alat u poljima morfologije, molekularne stanične biologije, neuroznanosti, farmakologije, genetike i drugim znanstvenim poljima.
Priprema uzorka za konfokalnu mikroskopiju kritičan je korak prije detekcije. Uzorke je potrebno označiti fluorescentnim sondama (jednostrukim, dvostrukim, trostrukim).
the
Uzorci mogu biti fiksirana ili živa tkiva, ili fiksirane ili žive prianjajuće kulture. Stanice treba uzgajati na posebnim malim posudama za kulture Confocal ili pokrovnim stakalcima. Suspendirajte stanice, protresite ili ispustite kriške i pokrijte pokrovnom folijom. Zda debljina uzorka je oko 1~2 mm, debljina upotrijebljenog pokrovnog stakla trebala bi biti manja od 0.17 mm, a debljina stakalca trebala bi biti između 0.8~1.2 mm, a površina je glatka, debljina je ujednačena i nema očite interferencijske fluorescencije. Medij za postavljanje često se koristi za fiksirane uzorke, a glicerol pripremljen u PBS-u s pH 8.5-9 obično se koristi za postavljanje.
Zahtjevi za rutinsku pripremu uzorka:
1. Odabir bojila
Budući da konfokalni mikroskop koristi laser s jednom valnom duljinom kao izvor svjetlosti, izbor fluorescentnih boja trebao bi se temeljiti na valnoj duljini lasera opremljenog konfokalnim mikroskopom. Ako postoji više fluorescentnih boja u istom uzorku, njihovu valnu duljinu emisije također treba uzeti u obzir što je više moguće. Nemojte se preklapati kako biste izbjegli probleme s različitim bojama.
2. Izbor nosača uzorka
Općenito, leća objektiva velike snage konfokalnog mikroskopa je uljna leća, njezina je numerička apertura mala, a radna udaljenost između leće i uzorka ne smije biti veća od 0.17 mm. Predmetna i pokrovna stakalca su u redu. Ako se radi o suspendiranim stanicama ili suspendiranim česticama, za nošenje uzorka za promatranje može se koristiti petrijeva zdjelica namijenjena konfokalnom mikroskopu.
3. Odabir medija za ugradnju
Ako uzorak treba promatrati samo jednom, a fluorescenciju nije lako ugasiti, možete odabrati određenu koncentraciju mješavine glicerola za zatvaranje stakalca. Ako se uzorak treba postaviti na određeno vrijeme i uzeti više puta, treba odabrati medij za prigušivanje fluorescencije kako bi se smanjio gubitak fluorescentnih signala.
