Zahtjevi za izradu uzoraka za fluorescentni mikroskop
(1) Staklo
Debljina stakalca trebala bi biti između 0,8 i 1,2 mm. Ako je predmetno stakalce predebelo, s jedne strane će apsorbirati više svjetla, as druge strane neće dopustiti da se pobudno svjetlo skupi na preparatu. Predmetno staklo mora biti glatko, ujednačene debljine i ne smije imati očitu spontanu fluorescenciju. Ponekad su potrebni stakalci od kvarcnog stakla.
(2) Pokrovno staklo
Debljina pokrovnog stakla je oko 0,17 mm i glatko je. Kako bi se pojačala pobudna svjetlost, također se može koristiti interferentno pokrovno staklo. Ovo je posebno dizajnirano pokrovno staklo s nekoliko slojeva tvari (kao što je magnezijev fluorid) koje imaju različite učinke interferencije na svjetlost različitih valnih duljina. Može omogućiti glatko prolaženje fluorescencije, dok svjetlo pobude refleksije može pobuditi uzorak.
(3) Uzorak
Kriške tkiva ili drugi uzorci ne smiju biti predebeli. Ako su predebele, najveći dio pobudne svjetlosti troši se u donjem dijelu preparata, dok gornji dio koji izravno promatra leća objektiva nije u potpunosti pobuđen. Osim toga, preklapanje stanica ili maskiranje nečistoća može utjecati na prosudbu.
(4) Sredstvo za brtvljenje
Kao sredstvo za montažu obično se koristi glicerin, koji ne smije imati spontanu fluorescenciju, bezbojan je i proziran. Svjetlina fluorescencije relativno je jaka pri pH 8.5-9.5 i nije je lako brzo nestati. Stoga se jednaka mješavina glicerola i 0.5mol/lpH9.0-9.5 karbonatnog pufera obično koristi kao sredstvo za montiranje.
(5) Ulje za ogledalo
Kada koristite fluorescentni mikroskop tamnog polja i uljni mikroskop za promatranje uzoraka, potrebno je koristiti ulje za leće. Najbolje je koristiti posebno napravljeno nefluorescentno ulje za leće, koje se također može zamijeniti glicerolom kao što je gore navedeno. Također se može koristiti i tekući parafin, ali je indeks loma nizak i malo utječe na kvalitetu slike.
