Metode obrade uzoraka i koraci za elektronsku mikroskopiju
Prije korištenja transmisijskog elektronskog mikroskopa za promatranje bioloških uzoraka, uzorke je potrebno prethodno obraditi. Znanstvenici koriste različite metode obrade prema zahtjevima različitih istraživačkih zahtjeva.
Fiksacija: Kako bi se uzorak očuvao što je više moguće, glutaraldehid se koristi za stvrdnjavanje uzorka i osminska kiselina za bojenje masti.
Hladna fiksacija: Uzorak se brzo zamrzne u tekućem etanu tako da voda ne kristalizira i umjesto toga formira amorfni led. Ovako konzervirani uzorci manje su oštećeni, ali je kontrast slike vrlo nizak.
Dehidracija: Koristite etanol i aceton da zamijenite vodu.
Podstavljen: uzorak se može podijeliti nakon što je podstavljen.
Segmentacija: Uzorak se reže na tanke kriške dijamantnom oštricom.
Bojanje: Teški atomi poput olova ili urana raspršuju elektrone jače od lakših atoma i stoga se mogu koristiti za povećanje kontrasta.
Prije uporabe transmisijskog elektronskog mikroskopa za promatranje metala uzorak se mora
Virusi pod elektronskim mikroskopom
Rezanje na vrlo tanke kriške (oko 0,1 mm) i zatim korištenje elektrolitičkog poliranja za nastavak stanjivanja metala često završi stvaranjem rupe u središtu uzorka gdje elektroni mogu proći kroz vrlo tanki metal koji se tamo nalazi. Metali koji se ne mogu elektrolitički polirati ili materijali koji nisu vodljivi ili imaju lošu vodljivost, kao što je silicij, općenito se mehanički razrjeđuju i zatim obrađuju ionskim udarom. Kako bi se spriječilo nakupljanje statičkog elektriciteta nevodljivih uzoraka u skenirajućem elektronskom mikroskopu, njihove površine moraju biti prekrivene vodljivim slojem.
Zašto elektronski mikroskopi imaju veću rezoluciju?
Kao što naziv govori, takozvani elektronski mikroskop je mikroskop koji koristi elektronske zrake kao izvor osvjetljenja. Budući da se elektronski snop može savijati pod djelovanjem vanjskog magnetskog ili električnog polja, tvoreći fenomen loma sličan onom kod prolaska vidljive svjetlosti kroz staklo, možemo koristiti ovaj fizički učinak za stvaranje "leće" za elektronski snop, čime razvijanje elektronskog mikroskopa. Karakteristika transmisijskog elektronskog mikroskopa (TEM) je da koristimo elektronske zrake koje prolaze kroz uzorak do slike, što se razlikuje od skenirajućeg elektronskog mikroskopa (Scanning Electron Microscope, SEM). Budući da je valna duljina valova elektrona puno manja od valne duljine vidljive svjetlosti (valna duljina valova elektrona od 100kV je 0,0037nm, dok je valna duljina ljubičaste svjetlosti 400nm), prema optičkoj Prema teoriji, možemo očekivati da bi moć razlučivosti elektronskih mikroskopa trebala biti mnogo bolja od one optičkih mikroskopa. Zapravo, sposobnost razlučivosti modernih elektronskih mikroskopa dosegla je 0,1 nm. Izborni udžbenik fizike za učenike viših razreda srednje škole to detaljnije objašnjava (male informacije iza fotoelektričnog efekta)
