Nekoliko napomena i savjeta za korištenje mikroskopije s faznim kontrastom
Korištenje mikroskopije s faznim kontrastom
1) Ugradite uređaj za fazni kontrast: uklonite sabirnu leću običnog mikroskopa i postavite sabirnu leću s prstenastom dijafragmom na odgovarajući mikroskop; ukloniti obični objektiv mikroskopa i zamijeniti ga objektivom s faznom pločom; zamijenite okular okularima za fokusiranje za fazno kontrastne mikroskope; posebni zeleni filtri (ponekad nisu potrebni) postavljaju se na svjetlosni ulaz izvora svjetlosti.
2) Poravnanje svjetla i fokus: Podesite okular za fokusiranje i vijak za podešavanje debljine dok se bijeli krug i crni krug ne budu jasno vidjeli u vidnom polju. Crni krug je fiksiran, a bijeli krug se može pomicati podešavanjem vijka na kondenzatorskom uređaju, tako da se crni krug i bijeli krug potpuno podudaraju. Skinite okular za fokusiranje i zamijenite ga originalnim okularom mikroskopa za provjeru.
Analiza problema u korištenju fazno kontrastnog mikroskopa
1. Utjecaj debljine uzorka Prilikom promatranja faznog kontrasta, debljina uzorka treba biti 5 μm ili tanja. Kada koristite deblji uzorak, gornji sloj uzorka je vrlo čist, ali duboki sloj će biti zamućen i uzrokovati smetnje pomaka faze. i raspršivanje svjetlosti.
2. Utjecaj pokrovnog stakla i stakalca Uzorak mora biti prekriven pokrovnim staklom, inače se svijetli prsten prstenaste dijafragme i tamni prsten fazne ploče teško preklapaju. Promatranje faznog kontrasta također ima visoke zahtjeve za kvalitetu stakla dijapozitiva i pokrovnog stakla. Ako postoje ogrebotine, nejednaka debljina ili neravnine, pojavit će se izobličenje svijetlog prstena i fazne smetnje. Osim toga, kada je stakalce predebelo ili pretanko, svijetli prsten prstenaste dijafragme postat će veći ili manji.
3. Halo i efekt blijeđenja U procesu snimanja fazno kontrastnim mikroskopom, kada određena struktura postane tamna zbog kašnjenja faze, to nije gubitak svjetla, već rezultat preraspodjele svjetla na ravnini slike. Tako će se svjetlost koja je naizgled izgubljena u tamnim područjima pojaviti kao svijetla aureola oko tamnijih objekata. To je nedostatak fazno kontrastne mikroskopije, koja otežava promatranje finih struktura, a halo fenomen je ozbiljniji kada je prstenasta dijafragma vrlo uska. Drugi fenomen u fazno-kontrastnoj mikroskopiji je efekt sjenčanja, koji se odnosi na gubitak kontrasta na rubovima većeg područja s istim faznim kašnjenjem kada se promatra faznim kontrastom.
4. Fazna inverzija Kada je n'n, svijetli i tamni kontrast slike su upravo suprotni, što se naziva fazna inverzija. Neprepoznatljivo je kada fazna razlika δ=0, a kontrast postaje veći s porastom δ, a fazna inverzija će se pojaviti kada δ nastavi rasti do određene vrijednosti. Kada se koristi leća objektiva s visokom vrijednošću apsorbancije od 90 (visokog kontrasta), ova vrijednost transformacije je oko 0.55λ, a kada se koristi leća objektiva sa standardnom vrijednošću apsorpcije od 70 posto, to je oko 0,33λ . Objektivi s višim vrijednostima apsorbancije trebaju se koristiti za rješavanje manjih razlika u optičkom putu.
