Vještine i metode korištenja fluorescentnog mikroskopa
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa 1. Širokokutni okular 2. Akromatski objektiv 3. Pretvarač objektiva s četiri rupe 4. Emitirajući fluorescentni uređaj plavo (b) zeleno (g) sustav pobude 100W živina žarulja 5. Koaksijalna gruba Mehanizam mikrofokusiranja: raspon fokusiranja 15 mm, vrijednost mikromreže 0,002 mm 6. Uzdužni raspon pomicanja dvoslojnog mehaničkog radnog stola: 70 mm, raspon bočnog pomicanja: 50 mm.
Vještine i metode korištenja fluorescentnog mikroskopa
(1) stakalce
Debljina stakalca trebala bi biti između 0.8-1.2 mm i 1,2 mm. Predebelo predmetno stakalce neće apsorbirati puno svjetla s jedne strane, a s druge strane neće dovesti do skupljanja pobudne svjetlosti na uzorku. Stakalce mora biti glatko, ujednačene debljine i bez očite spontane fluorescencije. Ponekad su potrebni Shi Ying stakalci.
(2) Pokrovno staklo
Pokrovno staklo je debljine oko 0,17 mm i glatko je. Kako bi se pojačala pobudna svjetlost, također se može koristiti interferencijsko pokrovno staklo, koje je vrsta posebnog pokrovnog stakla s nekoliko slojeva tvari (kao što je magnezijev fluorid) koje imaju različite interferencijske učinke na različitim valnim duljinama svjetlosti. Može učiniti da fluorescencija prolazi glatko i reflektira pobudno svjetlo, a ovo reflektirano pobudno svjetlo može pobuditi uzorak.
(3) Uzorci
Isječci tkiva ili drugi uzorci ne smiju biti predebeli. Ako je predebeo, najveći dio pobudne svjetlosti troši se u donjem dijelu preparata, dok gornji dio koji izravno promatra leća objektiva nije u potpunosti pobuđen. Osim toga, preklapanje stanica ili maskiranje nečistoća utječe na prosudbu.
(4) sredstvo za brtvljenje
Glicerol se obično koristi kao sredstvo za brtvljenje, koje mora biti bezbojno i prozirno bez spontane fluorescencije. Svjetlina fluorescencije je jarka pri pH 8,5 ~ 9,5 i nije je lako brzo izblijediti. Stoga se ekvivalentna smjesa glicerola i 0.5 mol/l PH9.0 ~ 9.5 karbonatnog pufera često koristi kao sredstvo za brtvljenje.
(5) ulje za ogledalo
Općenito, ulje za zrcalo mora se koristiti kada se uzorci promatraju fluorescentnim mikroskopom tamnog polja i uljnim zrcalom. Najbolje je koristiti specijalno nefluorescentno ulje za zrcala ili umjesto njega može poslužiti gore navedeni glicerin. Može se koristiti i tekući parafin, ali je indeks loma nizak, što malo utječe na kvalitetu slike.
