Tehnički parametri i vještine korištenja fluorescentnog mikroskopa
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa 1. Širokokutni okular 2. Akromatska leća objektiva 3. Konverter objektiva s četiri rupe 4. Uređaj za padajuću fluorescenciju Plavi (B) Zeleni (G) sustav pobude 100W živina lampa 5. Koaksijalna gruba mikro mehanizam za fokusiranje: raspon fokusiranja 15 mm Vrijednost mikro mreže 0,002 mm 6. Dvoslojni mehanički radni stol uzdužni raspon pomicanja: 70 mm Lateralni raspon pomicanja: 50 mm
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa
1. Širokokutni okular
2. Akromatska leća objektiva
3. Konverter objektiva s četiri rupe
4. Uređaj za padajuću fluorescenciju Plavi (B) Zeleni (G) Sustav pobude Živina žarulja od 100 W
Koaksijalni grubi mikro mehanizam za fokusiranje: raspon fokusiranja: 15 mm, vrijednost mikro mreže: 0.002 mm
6. Dvoslojni mehanički radni stol
Raspon uzdužnog pomicanja: 70 mm Raspon bočnog pomicanja: 50 mm
Savjeti i metode za korištenje fluorescentne mikroskopije
（1） Slajd
Debljina stakalca trebala bi biti između 0,8 i 1,2 mm. Ako je predmetno stakalce predebelo, s jedne strane apsorbira previše svjetla, as druge strane ne može uzrokovati skupljanje ekscitacijske svjetlosti na preparatu. Stakalce mora biti glatko i čisto, ujednačene debljine i bez značajne spontane fluorescencije. Ponekad su potrebni stakalci od kvarcnog stakla.
（2） Pokrovno staklo
Debljina pokrovnog stakla je oko 0,17 mm, glatko je i čisto. Kako bi se pojačala pobuda, također se može koristiti interferentno pokrovno staklo. Ovo je posebno pokrovno staklo presvučeno s nekoliko slojeva tvari (kao što je magnezijev fluorid) koje imaju različite učinke interferencije na različitim valnim duljinama svjetlosti. Može dopustiti glatko prolaženje fluorescencije, dok reflektira pobuđivanje, što može pobuditi uzorak.
（3） Uzorak
Isječci tkiva ili drugi uzorci ne smiju biti predebeli. Na primjer, ako su predebele, većina pobudne svjetlosti troši se u donjem dijelu uzorka, dok gornji dio koji izravno promatra leća objektiva nije dovoljno pobuđen. Osim toga, preklapanje stanica ili maskiranje nečistoća može utjecati na prosudbu.
（4） Sredstvo za montažu
Glicerin se obično koristi kao sredstvo za montažu, a mora biti bez spontane fluorescencije, bezbojan i proziran. Svjetlina fluorescencije je svjetlija pri pH 8,5 do 9,5 i nije lako brzo izblijedjeti. Stoga se ekvivalentna mješavina glicerola i 0.5 mol/l otopine karbonatnog pufera s pH od 90 do 9,5 obično koristi kao sredstvo za montiranje.
（5） Ulje za ogledala
Općenito, kada koristite fluorescentni mikroskop tamnog polja i uljni mikroskop za promatranje uzoraka, potrebno je koristiti ulje za leće. Najbolje je koristiti posebno nefluorescentno ulje za leće, koje se može zamijeniti i gore spomenutim glicerolom. Može se koristiti i tekući parafin, ali je indeks loma nizak, što malo utječe na kvalitetu slike.
