Princip i strukturne karakteristike fluorescentnog mikroskopa
Fluorescentna mikroskopija koristi točku s visokom svjetlosnom učinkovitošću za emitiranje svjetlosti određene valne duljine (kao što je ultraljubičasto svjetlo od 3650 inča ili ljubičasto plavo svjetlo od 4200 inča) kroz sustav filtera kao pobudno svjetlo za pobuđivanje fluorescentnih tvari u uzorku da emitiraju fluorescenciju razne boje Nakon toga promatrajte kroz povećanje objektiva i okulara. Na taj način, pod jakom kontrastnom pozadinom, čak i ako je fluorescencija vrlo slaba, lako se identificira i ima visoku osjetljivost. Uglavnom se koristi za istraživanje stanične strukture i funkcije te kemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa plus nekih dodataka (kao što je fluorescentni izvor svjetlosti, pobudni filtar, dvobojni razdjelnik snopa i blokirajući filtar, itd.). Fluorescentni izvor svjetlosti—općenito koristite živinu lampu ultravisokog tlaka (50-200W), koja može emitirati svjetlost različitih valnih duljina, ali svaka fluorescentna tvar ima valnu duljinu pobude koja proizvodi najjaču fluorescenciju, tako da filtar pobude (općenito, postoje ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni ekscitacijski filtri), koji dopuštaju samo ekscitacijskoj svjetlosti određene valne duljine da prođe i ozrači uzorak, dok apsorbira drugu svjetlost. Nakon što je svaka tvar ozračena pobudnim svjetlom, emitira vidljivu fluorescenciju s dužom valnom duljinom od valne duljine ozračivanja u vrlo kratkom vremenu. Fluorescencija je specifična i općenito slabija od ekscitacijske svjetlosti. Kako bi se promatrala specifična fluorescencija, blokiranje (ili potiskivanje) mora se dodati iza leće objektiva i koristiti zajedno s njom.
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog mikroskopa
1. Metoda osvjetljavanja je obično episkopska, tj. izvor svjetlosti projicira se na uzorak kroz leću objektiva;
2. Izvor svjetlosti je ultraljubičasto svjetlo, valna duljina je kraća, a rezolucija veća od običnih mikroskopa;
3. Postoje dva posebna filtra, onaj ispred izvora svjetlosti koristi se za filtriranje vidljive svjetlosti, a onaj između okulara i leće objektiva koristi se za filtriranje ultraljubičastih zraka radi zaštite ljudskog oka.
Fluorescencijski mikroskop također je vrsta optičkog mikroskopa, glavna razlika je u tome što je valna duljina pobude ta dva različita. Ovo određuje razliku između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa u pogledu strukture i upotrebe.
Fluorescentna mikroskopija je bitan alat u imunofluorescentnoj citokemiji. Sastoji se od glavnih komponenti kao što su izvor svjetlosti, sustav filtarske ploče i optički sustav. To je korištenje određene valne duljine svjetlosti za pobuđivanje uzorka da emitira fluorescenciju i promatranje fluorescentne slike uzorka pojačavanjem leće objektiva i sustava okulara.
