Postoje dvije vrste fluorescentnih mikroskopa na temelju njihove svjetlosne staze:
1. Transmisijski fluorescentni mikroskop: Ekscitacijski izvor svjetlosti koristi se za pobuđivanje fluorescencije prolaskom kroz materijal uzorka kroz kondenzorsku leću. Također se mogu koristiti uobičajeni koncentratori tamnog polja, a obični koncentratori mogu se koristiti za podešavanje reflektora za preusmjeravanje i bočno usmjeravanje pobudne svjetlosti na uzorak. Ovo je relativno staromodan fluorescentni mikroskop. Prednost mu je jaka fluorescencija pri malom povećanju, a nedostatak mu je što mu fluorescencija opada s povećanjem. Stoga je bolji za promatranje materijala većih uzoraka.
2. Fluorescencijski mikroskop u padajućem svjetlu je nova vrsta fluorescentnog mikroskopa razvijena u moderno doba. Za razliku od gore navedenog, pobudna svjetlost pada s leće objektiva prema dolje na površinu uzorka, koristeći istu leću objektiva kao kondenzator za osvjetljavanje i leću objektiva za prikupljanje fluorescencije. Dvobojni razdjelnik snopa treba dodati optičkoj stazi, koja je 45 stupnjeva udaljena od svjetlosnog urana. Kut, pobudna svjetlost se reflektira u leću objektiva i fokusira na uzorak. Fluorescencija koju stvara uzorak, kao i pobudna svjetlost reflektirana od površine leće objektiva i pokrovnog stakla, ulaze u leću objektiva i vraćaju se u dvobojni razdjelnik snopa, odvajajući pobudnu svjetlost i fluorescenciju. Preostalo pobudno svjetlo tada apsorbira filter za blokiranje. Ako se koriste različite kombinacije filtara pobude/dvobojnih separatora snopa/filtara za blokiranje, oni mogu zadovoljiti potrebe različitih fluorescentnih reakcijskih proizvoda. Prednosti ovog fluorescentnog mikroskopa su ravnomjerno osvjetljenje polja, jasna slika i jača fluorescencija s većim povećanjem.
Upute za korištenje fluorescentnog mikroskopa
1. Uključite izvor svjetla. Živinu žarulju ultravisokog pritiska potrebno je prethodno zagrijati nekoliko minuta kako bi se postigla maksimalna svjetlina.
2. Transmisijska fluorescentna mikroskopija zahtijeva ugradnju potrebnog pobudnog filtra između izvora svjetiljke i kondenzatora, te odgovarajućeg blokirajućeg filtra iza leće objektiva. Fluorescencijski mikroskop padajućeg svjetla treba umetnuti potrebni filtar za pobudu/dvostruki razdjelnik zrake u boji/blok filtara za blokiranje u utor optičkog puta.
3. Promatrajte mikroskopom male snage i namjestite središte izvora svjetlosti prema uređaju za podešavanje različitih tipova fluorescentnih mikroskopa, tako da se nalazi u središtu cijele točke osvjetljenja.
4. Postavite uzorak i fokusirajte ga za promatranje. Treba obratiti pozornost tijekom uporabe: Nemojte promatrati izravno očima prije postavljanja filtra kako biste izbjegli oštećenje očiju; Kada se uzorci promatraju uljnim mikroskopom, mora se koristiti poseban nefluorescentni uljni mikroskop; Nakon što se visokotlačna živina lampa isključi, ne može se odmah ponovno uključiti. Za ponovno pokretanje potrebno je 5 minuta, inače će biti nestabilno i utjecati na životni vijek živine žarulje.
(3) Promatranjem pod fluorescentnim mikroskopom na platformi za podučavanje pomoću filtra plave ljubičaste svjetlosti, mogu se vidjeti stanice obojene 0.01% akridin narančastom fluorescentnom bojom. Jezgra i citoplazma su pobuđeni da proizvode dvije različite boje fluorescencije (tamnozelenu i narančastocrvenu).
