Koja je razlika između fluorescentne i laserske konfokalne mikroskopije?
fluorescentni mikroskop
1. Fluorescencijski mikroskop je uređaj koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti za osvjetljavanje predmeta koji se testira, uzrokujući njegovo emitiranje fluorescencije, a zatim promatranje oblika i položaja predmeta pod mikroskopom. Fluorescentna mikroskopija koristi se za proučavanje apsorpcije, transporta, distribucije i lokalizacije tvari unutar stanica. Neke tvari u stanicama, poput klorofila, mogu emitirati fluorescenciju nakon što su izložene ultraljubičastom zračenju; Neke tvari same po sebi možda neće emitirati fluorescenciju, ali ako su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijelima, također mogu emitirati fluorescenciju pod ultraljubičastim zračenjem. Fluorescentna mikroskopija jedan je od alata za kvalitativno i kvantitativno istraživanje ovih tvari.
2. Princip fluorescentnog mikroskopa:
(A) Izvor svjetlosti: Izvor svjetlosti emitira svjetlost različitih valnih duljina (od ultraljubičaste do infracrvene).
(B) Ekscitacijski filtar izvor svjetlosti: Odašiljanje svjetlosti određene valne duljine koja može proizvesti fluorescenciju u uzorku, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za ekscitaciju fluorescencije.
(C) Fluorescentni uzorci: općenito obojeni fluorescentnim pigmentima.
(D) Blokirajući filtar: selektivno prenosi fluorescenciju blokirajući pobudno svjetlo koje uzorak nije apsorbirao, a neke se valne duljine također selektivno prenose u fluorescenciji. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetla za emitiranje fluorescencije iz ozračenog objekta. Elektronski mikroskop prvi su sastavili Knorr i Harroska u Berlinu u Njemačkoj 1931. godine. Ova vrsta mikroskopa koristi snop elektrona velike brzine umjesto snopa svjetlosti. Zbog puno kraće valne duljine protoka elektrona u usporedbi sa svjetlosnim valovima, povećanje elektronskog mikroskopa može doseći 800000 puta, s minimalnom granicom rezolucije od 0,2 nanometra. Skenirajući elektronski mikroskop, koji se počeo koristiti 1963. godine, omogućuje ljudima da vide sitne strukture na površini predmeta.
3. Opseg primjene: Koristi se za povećanje slika malih objekata. Općenito se koristi za promatranje biologije, medicine, mikroskopskih čestica itd.
konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop dodaje polureflektirajuću leću putanji reflektirane svjetlosti, koja savija reflektirano svjetlo koje je već prošlo kroz leću u drugim smjerovima. Postoji pregrada s rupom u žarištu, a mala rupica nalazi se u žarištu. Iza pregrade nalazi se fotomultiplikatorska cijev. Može se zamisliti da se reflektirano svjetlo prije i poslije žarišne točke detekcijskog svjetla ne može fokusirati na malu rupu kroz ovaj konfokalni sustav i da će biti blokirano pregradom. Dakle, fotometar mjeri intenzitet reflektirane svjetlosti u žarištu.
2. Načelo: Tradicionalni optički mikroskopi koriste poljske izvore svjetlosti, a slika svake točke na uzorku bit će pod utjecajem difrakcije ili raspršenog svjetla sa susjednih točaka; Laserski skenirajući konfokalni mikroskop koristi lasersku zraku za formiranje točkastog izvora svjetlosti kroz osvijetljenu rupicu za skeniranje svake točke u žarišnoj ravnini uzorka. Osvijetljena točka na uzorku slika se na rupici za otkrivanje i prima je točku po točku ili linija fotomultiplikatorskom cijevi (PMT) ili termoelektričnim uređajem za spajanje (cCCD) nakon rupice za detekciju, brzo formirajući fluorescentnu sliku na monitoru računala. zaslon. Rupica za osvjetljavanje i rupica za detekciju spojene su u odnosu na žarišnu ravninu leće objektiva. Točke na žarišnoj ravnini istovremeno su fokusirane na rupicu za osvjetljavanje i rupicu za emisiju, a točke izvan žarišne ravnine neće biti prikazane na rupici za otkrivanje. To rezultira konfokalnom slikom koja predstavlja optički presjek uzorka, prevladavajući nedostatak zamućenih slika u konvencionalnoj mikroskopiji.
3. Područja primjene: uključuju medicinu, istraživanje životinja i biljaka, biokemiju, bakteriologiju, biologiju stanica, tkiva i embrija, znanost o hrani, genetiku, farmakologiju, fiziologiju, optiku, patologiju, botaniku, neuroznanost, biologiju mora, znanost o materijalima, elektroničku znanost, mehanika, naftna geologija i mineralogija.
