Koji se mikroskop koristi da bi se vidio oblik mikrobnih stanica
Zajednički naziv za sve sićušne organizme koje je pojedincima teško promatrati golim okom. Mikroorganizmi uključuju bakterije, viruse, gljivice i nekoliko algi. (Međutim, neki mikroorganizmi vidljivi su golim okom, kao što su gljive koje pripadaju gljivama, Ganoderma lucidum, itd.) Virusi su vrsta "nestaničnih organizama" sastavljenih od nekoliko komponenti kao što su nukleinske kiseline i proteini, ali njihovi preživljavanje mora ovisiti o živim stanicama. Prema različitim okruženjima koja postoje, mogu se podijeliti na prokariotske mikroorganizme, svemirske mikroorganizme, gljivične mikroorganizme, kvasčeve mikroorganizme, morske mikroorganizme itd.
Uloga i šteta mikroorganizama:
Jedan od najvažnijih utjecaja mikroorganizama na čovjeka je prevalencija zaraznih bolesti. 50 posto ljudskih bolesti uzrokovano je virusima. Povijest mikroba koji uzrokuju ljudske bolesti je povijest stalne borbe ljudskih bića s njima. Ljudska bića su postigla velik napredak u prevenciji i liječenju bolesti, ali i dalje se pojavljuju nove i ponovno pojavljujuće mikrobne infekcije, poput velikog broja virusnih bolesti za koje nedostaju učinkoviti terapeutski lijekovi. Patogeni mehanizam nekih bolesti nije jasan. Zlouporaba velikog broja antibiotika širokog spektra uzrokovala je snažan selekcijski pritisak, uzrokujući mutaciju mnogih sojeva, što dovodi do pojave rezistencije na lijekove, a ljudskom zdravlju prijete nove prijetnje. Neki segmentirani virusi mogu mutirati rekombinacijom ili preraspodjelom. Najtipičniji primjer je virus influence.
Nakon poznavanja specifične definicije mikroorganizama, koju bi vrstu mikroskopa eksperimentator trebao koristiti pri proučavanju mikroorganizama da bi vidio, i koji se mikroskop može koristiti za bolje viđenje, te za promatranje i analizu uobičajenih oblika mikroba.
Izum mikroskopa je da se mogu vidjeti nasmijani objekti koji se ne mogu vidjeti golim okom. Veličina mikroorganizama je vrlo mala, pa ih je potrebno povećati i promatrati uz pomoć mikroskopa. Osim toga, postoji mnogo vrsta mikroorganizama, tako da u osnovi većina optičkih mikroskopa može. Za promatranje mikroorganizama, sljedeće je pitanje koju vrstu mikroskopa treba koristiti za promatranje i analizu mikroorganizama. Uobičajeni mikroskopi za promatranje mikrobne morfologije uključuju biološke mikroskope, fazno kontrastne mikroskope, invertne mikroskope, fluorescentne mikroskope i konfokalne mikroskope. Mikroskop i tako dalje.
U nastavku su opisani različiti mikroskopi koji se koriste za promatranje mikroorganizama:
1. Obični svjetlosni mikroskop
Kao izvor svjetlosti koristi se prirodno svjetlo ili svjetlost, a valna duljina mu je oko {{0}}.4 μm. Razlučivost mikroskopa je polovica valne duljine, odnosno 0.2 μm, a najmanja slika vidljiva golim okom je 0.2 mm. Stoga korištenje uljnog (imerzijskog) zrcala za povećanje od 1000 puta može povećati čestice od 0,2 μm na 0,2 mm vidljive golim okom. Obični optički mikroskopi mogu se koristiti za promatranje bakterija, aktinomiceta i gljivica.
2. Mikroskopija tamnog polja obično se koristi za promatranje morfologije i kretanja neobojenih mikroba. Nakon što se kondenzor tamnog polja ugradi u obični mikroskop, svjetlost ne može prodrijeti izravno iz sredine, a vidno polje je tamno. Kada uzorak dobije koso svjetlo s ruba kondenzatora, ono se može raspršiti, pa se u pozadini tamnog polja mogu uočiti svijetli mikroorganizmi poput bakterija ili spiroheta.
3. Mikroskop s faznim kontrastom Mikroskop s faznim kontrastom koristi svjetlosni učinak ploče s faznom razlikom za promjenu faze svjetlosti i amplitude izravne svjetlosti i pretvara razliku faze svjetlosti u razliku intenziteta svjetlosti. Pod fazno-kontrastnim mikroskopom, kada svjetlost prolazi kroz neobojeni uzorak, razlika u svjetlosnoj fazi je uzrokovana nedosljednošću gustoće različitih dijelova preparata, te se mogu promatrati morfologija, unutarnja struktura i način kretanja mikroorganizama.
4. Fluorescentni mikroskop Fluorescentni mikroskop je u osnovi isti kao i obični optički mikroskop, glavna razlika je izvor svjetlosti, filter i kondenzator. Trenutačno većina njih koristi epi-light uređaje, a kao izvor svjetlosti obično se koriste visokotlačne živine lampe koje mogu emitirati ultraljubičasto ili plavo-ljubičasto svjetlo. Postoje dvije vrste filtara: pobudni filtar i apsorpcijski filtar. Uz općenite kondenzatore svijetlog polja, kondenzatori tamnog polja također se mogu koristiti u fluorescentnim mikroskopima koji koriste plavo svjetlo za poboljšanje kontrasta između fluorescencije i pozadine. Ova metoda je primjenjiva za detekciju ili identifikaciju bakterija obojenih fluorescentnim pigmentima ili u kombinaciji s fluorescentnim antitijelima.
5. Elektronski mikroskopi koriste protok elektrona kao izvor svjetlosti. U usporedbi s vidljivom svjetlošću, valna duljina je desetke tisuća puta drugačija, što uvelike poboljšava razlučivost. Magnetska zavojnica koristi se kao sustav optičkog pojačanja, a povećanje može doseći desetke tisuća ili stotine tisuća puta. Često se koristi u virusnim česticama. i promatranje bakterijske ultrastrukture.
Promatranje neobojanih mikrobnih uzoraka:
Neobojani uzorci općenito se mogu koristiti za promatranje bakterijske morfologije, snage i kretanja. Bakterije su bezbojne i prozirne kada nisu obojene, a promatraju se pod mikroskopom uglavnom po razlici između indeksa loma bakterije i okolnog okoliša. Bakterije s bičevima kreću se snažno, dok bakterije bez bičeva pokazuju nepravilno Brownovo gibanje. Žive bakterije kao što su Treponema pallidum, Leptospira i Campylobacter imaju karakteristične oblike i obrasce kretanja, koji su od dijagnostičkog značaja. Najčešće korištene metode su metoda pada tlaka, metoda visećeg pada i kapilarna metoda.
1. Metoda viseće kapi Nanesite vazelin oko konkavnog otvora čistog konkavnog stakalca, uzmite prsten bakterijske suspenzije s petljom za inokulaciju i stavite ga u središte pokrovnog stakla, zatim poravnajte konkavni otvor konkavnog stakalca s kapljicu u središte pokrovnog stakla i Stavite poklopac, zatim ga brzo okrenite, lagano pritisnite pokrovno stakalce kako bi se čvrsto zalijepilo za vazelin na rubu konkavne rupice, a zatim promatrajte pod visokom snagom mikroskop (ili tamno polje).
2. Uzmite prsten bakterijske suspenzije s petljom za inokulaciju i stavite ga u središte čistog staklenog stakalca metodom pada tlaka i nježno pokrijte bakterijsku suspenziju pokrovnim staklom, pazeći da izbjegnete stvaranje mjehurića zraka i spriječite bakterijsku suspenziju od prelijevanja. Promatranje u svijetlom polju (ili u tamnom polju) pod objektivom velike snage.
3. Kapilarna metoda uglavnom se koristi za ispitivanje kinetike anaerobnih bakterija. Obično odaberite duljinu od 60~70mm. Nakon sifoniranja suspenzije anaerobnih bakterija kroz kapilaru s otvorom od 0.5-1.0 mm, zatvorite dva kraja kapilare plamenom. Kapilara je fiksirana na predmetno staklo plastičnim papirom i promatrana pod visokoelektronskom lećom u tamnom polju.
Promatranje obojenih mikrobnih uzoraka mikroskopom:
Nakon što se bakterijski uzorak oboji, zbog oštrog kontrasta u boji između bakterije i okolnog okoliša, mogu se utvrditi morfološke karakteristike bakterije (kao što su veličina, oblik, raspored itd.) bakterija i neke posebne strukture jasno promatrane pod običnim optičkim mikroskopom (kao što su kapsule, flagele, spore itd.), a bakterije se mogu klasificirati i identificirati prema reaktivnosti bojenja.
(1) Opći postupak bakterijskog bojenja Opći postupak bakterijskog bojenja je: razmaz (sušenje)—fiksacija—bojenje.
1. Priprema razmaza krvi, sekreta, ekskreta, punktne tekućine i tekuće kulture, te izravni razmazi tankog filma na stakalcima; autopsije ili zaraženih životinjskih tkiva, namažite leziju vatom za uzorkovanje. Za pripremu bakterijskih kolonija ili travnjaka na čvrstom mediju, prvo upotrijebite petlju za inokulaciju da uzmete prsten normalne fiziološke otopine i stavite je u središte predmetnog stakalca, zatim upotrijebite petlju za inokulaciju da uzmete malu količinu kulture i usitnite je ravnomjerno u fiziološkoj otopini i rasporedite na 1 cm2. Velike ili male obojene površine ostavite da se prirodno osuši na sobnoj temperaturi ili polako sušite na udaljenosti.
2. Svrha fiksacije je ubiti bakterije, koagulirati bakterijski protein i strukturu te olakšati bojenje; potaknuti bakterije da prianjaju na stakalce kako bi se izbjeglo ispiranje vodom tijekom pranja; promijeniti propusnost bakterija za boje, što je korisno za strukturu bakterijskih stanica bojenja. Obično se fiksira zagrijavanjem na plamenu, a osušeni namaz brzo provuče kroz plamen 3 puta. Bolje je da ne opečete kožu na nadlanici kada dodirnete stakalce.
3. Bojanje Prema različitim svrhama inspekcije, odaberite različite metode bojenja za bojanje. Prilikom bojanja dodajte otopinu boje kap po kap kako biste povećali pokrivnost.
4. Jedlo Bilo koja tvar koja može pojačati afinitet između boje i obojenog predmeta, fiksirati boju na obojenom predmetu i izazvati promjenu propusnosti stanične membrane naziva se jedkom. Obično se koriste stipsa, taninska kiselina, metalne soli i jod, itd., a zagrijavanje se također koristi za pospješivanje bojenja. Sredstva za mrlje se mogu koristiti između primarnog bojenja i kontrabojanja, a mogu se koristiti i nakon fiksacije ili sadržana u fiksativu i bojenju.
5. Dekolorizacija Svako kemijsko sredstvo koje može ukloniti boju obojenog predmeta naziva se dekolorizator. Etanol, aceton itd. obično se koriste kao dekolorizatori. Sredstvo za obezbojenje može otkriti stupanj stabilnosti kombinacije bakterija i bojila, što se može koristiti za diferencijalno bojenje.
6. Suprotno bojenje Bakterije ili njihove strukture koje su obezbojene često se obojene otopinom protivbojanja radi lakšeg promatranja. Boja otopine za kontrastno bojenje razlikuje se od boje primarne otopine za bojenje i stvara oštar kontrast. Protubojanje ne smije biti prejako, kako ne bi prekrilo boju početnog bojenja.
