Zašto nam je potreban konfokalni mikroskop?
1. Nakon napora i poboljšanja naših velikih prethodnika, optički mikroskop je dosegao savršenu razinu. U stvari, obični mikroskopi mogu nam jednostavno i brzo pružiti prekrasne mikroskopske slike. No, dogodio se događaj koji je donio revolucionarnu inovaciju u ovaj gotovo savršen svijet mikroskopa, a to je izum "laserskog skenirajućeg konfokalnog mikroskopa". Karakteristika ove nove vrste mikroskopa je da usvaja optički sustav koji samo izvlači informacije o slici s površine gdje je fokus koncentriran. Promjenom fokusa uz vraćanje dobivenih informacija u slikovnu memoriju, može se dobiti živopisna slika s potpunom trodimenzionalnom informacijskom inteligencijom. Ovom metodom lako se mogu dobiti informacije o obliku površine koje se ne mogu potvrditi konvencionalnim mikroskopima. Osim toga, za tipične optičke mikroskope, "poboljšanje rezolucije" i "produbljivanje žarišne dubine" su kontradiktorni uvjeti, posebno pri velikom povećanju. Međutim, u konfokalnim mikroskopima ovaj se problem lako rješava.
2. Prednosti konfokalnih optičkih sustava
Shematski dijagram laserskog konfokalnog mikroskopa
Konfokalni optički sustav služi za osvjetljavanje uzorka točkama, dok reflektirano svjetlo također prima točkasti senzor. Kada se uzorak postavi u žarišnu točku, gotovo sva reflektirana svjetlost može doprijeti do fotoosjetljivog uređaja. Kada uzorak odstupi od žarišne točke, reflektirana svjetlost ne može doprijeti do fotoosjetljivog uređaja. To jest, u konfokalnom optičkom sustavu, samo slike koje se poklapaju sa žarišnom točkom bit će izlazne, a svjetlosna točka i beskorisno raspršeno svjetlo bit će zaštićeni.
Zašto koristiti laser?
U konfokalnom optičkom sustavu, uzorak je osvijetljen, a reflektirano svjetlo također prima točkasti senzor. Stoga postaju potrebni točkasti izvori svjetlosti. Laser je vrlo točkasti izvor svjetlosti. U većini slučajeva, izvor svjetlosti konfokalnog mikroskopa je laserski izvor svjetlosti. Osim toga, monokromatičnost, usmjerenost i odličan oblik zrake lasera također su važni razlozi za njihovu široku primjenu.
4. Promatranje u stvarnom vremenu temeljeno na brzom skeniranju postaje moguće
Lasersko skeniranje koristi akustični optički deflektor (AO prime) u vodoravnom smjeru i Servo Galvano zrcalo u okomitom smjeru. Zbog odsutnosti mehaničkih vibracija u audio optičkoj prednaponskoj jedinici, moguće je izvršiti skeniranje velikom brzinom i promatrati u stvarnom vremenu na zaslonu za praćenje. Brzina ove vrste fotoaparata vrlo je bitna stavka koja izravno utječe na brzinu fokusiranja i dohvaćanja pozicije.
5. Odnos između položaja žarišta i svjetline
U konfokalnom optičkom sustavu, svjetlina uzorka je visoka kada je pravilno postavljen u žarišnu poziciju, a njegova svjetlina naglo opada prije i poslije (puna linija na slici 4). Osjetljiva selektivnost ove žarišne ravnine upravo je princip koji stoji iza određivanja smjera visine i širenja žarišne dubine u konfokalnoj mikroskopiji. U usporedbi s ovim, tipični optički mikroskopi ne pokazuju značajne promjene svjetline prije i nakon položaja žarišta (točkasta linija na slici 4).
6. Visoki kontrast i razlučivost
Obično će se u optičkim mikroskopima pojaviti reflektirana svjetlost koja odstupa od žarišne točke
