Prednosti i ograničenja višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije
1. Pobuđeno crvenom ili infracrvenom svjetlošću, raspršenje svjetlosti je malo (raspršenje malih čestica obrnuto je proporcionalno četvrtoj potenciji valne duljine).
2. Nema potrebe za rupicama, koje mogu prikupiti više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike.
3. Rupice ne mogu razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranih ili žarišnih područja, a multifotoni imaju bolji omjer signala i šuma u dubokoj slici.
4. Uzorak lako apsorbira i prigušuje ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za pobuđivanje jednog fotona prije nego što zraka dosegne žarišnu ravninu, što otežava pobuđivanje dubokih slojeva.
5. Što se tiče promatranja biološkom mikroskopijom, prvo što treba uzeti u obzir je ne oštetiti aktivno stanje samog organizma i održati cirkulaciju vode, koncentraciju iona, kisika i hranjivih tvari. U području promatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar doze zračenja i svjetlosne energije koja ne oštećuje stanice.
6. Višefotonska mikroskopija također ima mnoge prednosti. U pogledu trodimenzionalne rezolucije, dubinske invazije, učinkovitosti raspršenja, pozadinskog svjetla, omjera signala i šuma, kontrole itd., laserski mikroskopi imaju neusporedive ili superiorne karakteristike koje prijašnji laserski mikroskopi nisu posjedovali.
Višefotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop proširen je na različita istraživanja i polja primjene Može izvoditi trodimenzionalno nedestruktivno promatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i poboljšati rezoluciju i omjer signala i šuma sustava Korištenjem promjena u svojstvima materijala nakon višefotonske ekscitacije, također se može postići trodimenzionalna pohrana podataka o visini i trodimenzionalna mikrofabrikacija u bilo kojem smjeru, što ima visoku vrijednost primjene Može se vjerovati da će s daljnjim razvojem mehaničkih, materijalnih i laserskih tehnologija vezanih uz višefotonsku konfokalnu mikroskopiju višefotonska konfokalna laserska skenirajuća mikroskopija imati sve veći razvoj i šire primjene.
Nedostaci su sljedeći:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak uključuje kromofore koji mogu apsorbirati pobudno svjetlo, kao što su pigmenti, uzorak može biti izložen toplinskom oštećenju.
3. Razlučivost je malo smanjena, iako se može poboljšati istodobnim korištenjem konfokalnih malih rupa, doći će do gubitka signala.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
