Usporedba konfokalne mikroskopije i konvencionalne optičke mikroskopije
Mikroskop je glavni alat za promatranje stanica. Prema različitim izvorima svjetlosti, može se podijeliti u dvije kategorije: optički mikroskopi i elektronski mikroskopi. Prvi koristi vidljivu svjetlost (ultraljubičasti mikroskop koristi ultraljubičasto svjetlo) kao izvor svjetlosti, dok drugi koristi snop elektrona kao izvor svjetlosti. U optičke mikroskope spadaju i obični optički mikroskopi i laserski konfokalni mikroskopi.
Obični optički mikroskop
Uobičajeni biološki mikroskop sastoji se od tri dijela, naime: ① sustav rasvjete, uključujući izvor svjetlosti i kondenzator; ② Sustav optičkog pojačanja, koji se sastoji od objektiva i okulara, glavno je tijelo mikroskopa. Kako bi se uklonile sferne i kromatske aberacije, i okular i objektiv sastoje se od složenih grupa leća. Mehanički uređaj, koji se koristi za fiksiranje materijala i olakšavanje promatranja.
Jasnoća mikroskopske slike ne ovisi samo o povećanju, već io razlučivosti. Rezolucija se odnosi na sposobnost mikroskopa (ili ljudskog oka na udaljenosti od 25 cm od cilja) da razlikuje objekte u malim intervalima. Veličina rezolucije ovisi o valnoj duljini svjetlosti, indeksu otvora blende i indeksu loma medija. Izražava se kao: R=0.61 λ/NANA=nsin /2, gdje je n=indeks loma medija; =kut otvora (kut pod kojim uzorak otvara otvor leće objektiva), NA=numerička apertura. Je li kut zrcala uvijek manji od 180?, pa maksimalna vrijednost zui za sina/2 mora biti manja od 1.
Indeks loma stakla koje se koristi u proizvodnji optičkih leća je 1.65-1.78, a što je indeks loma korištenog medija bliži indeksu loma stakla, to bolje. Za suhe leće objektiva medij je zrak, a omjer otvora blende općenito je 0.05-0.95; Uljna leća koristi cedrovo ulje kao medij, a omjer otvora blende može biti blizu 1,5.
Valna duljina obične svjetlosti je {{0}}nm, tako da vrijednost razlučivosti mikroskopa neće biti manja od 0,2 μm, a razlučivost ljudskog oka je 0,2mm. Stoga je maksimalno povećanje za dizajn mikroskopa obično 1000X.
