Metode otklanjanja grešaka i koraci za fazno kontrastnu mikroskopiju
a. Na temelju podešavanja Kuhlerovog sustava osvjetljenja, koristite metodu svijetlog polja za jasno fokusiranje uzorka;
b. Okrenite reflektor na Ph1 i poravnajte ga s linijom skale na gramofonu. Odaberite objektiv s faznim kontrastom 10 x i zamijenite ga prozirnim uzorkom koji želite promatrati;
c. Uklonite jedan od okulara, zamijenite ga teleskopom za centriranje i fokusirajte se na dva kontrastna prstena u vidnom polju (crni kontrastni prsten objektiva i kontrastni prsten propusnosti sabirne leće);
d. Dva različita prstena u vidnom polju ne moraju se nužno poklapati. Podesite dva uređaja za podešavanje na reflektoru (podešavanje lijevog i desnog položaja diferencijalnih prstenova pomoću šipki za podešavanje i tarnih tipki za podešavanje prednjeg i stražnjeg položaja), tako da se prozirni prsten pomiče naprijed-natrag kako bi se podudarao s crnim prstenom ;
e. Nakon podešavanja, vratite se na okular za promatranje i pritisnite zeleni filtar u optički put kako biste promatrali sliku fazne razlike uzorka;
f. Kod promatranja s objektivima 20 x i 40 x reflektor treba postaviti na položaj Ph2, a kod korištenja objektiva 100 x reflektor treba postaviti na položaj Ph3.
Područje primjene: Prikladno za promatranje prozirnih, neobojanih ili neobojanih uzoraka, kao što su razne stanice, živa tkiva, neobojeni ili neobojeni rezovi tkiva, vodeni organizmi itd.
Osnovni princip fazno kontrastnog mikroskopa
Kada svjetlost prolazi kroz relativno proziran uzorak, nema značajne promjene u valnoj duljini (boji) i amplitudi (svjetlini) svjetlosti. Stoga je pri promatranju neobojanih uzoraka (kao što su žive stanice) pod običnim optičkim mikroskopom često teško razlikovati njihovu morfologiju i unutarnju strukturu. Međutim, zbog razlika u indeksu loma i debljini različitih dijelova ćelije, postojat će razlike u optičkom putu izravne i difraktirane svjetlosti pri prolasku kroz ovaj uzorak. Kako se optički put povećava ili smanjuje, faza ubrzavanja ili zaostajanja svjetlosnih valova će se promijeniti (što rezultira faznom razlikom). Fazna razlika svjetlosti se ne može osjetiti golim okom, ali mikroskop za faznu razliku može pomoću svoje posebne naprave - kružnog otvora i fazne ploče, pomoću fenomena interferencije svjetlosti transformirati faznu razliku svjetlosti u razliku amplitude. (razlika svjetla i tame) koju može detektirati ljudsko oko. To čini da izvorno proziran objekt pokazuje očite razlike u svjetlu i tami, pojačava kontrast i omogućuje nam jasno promatranje živih stanica i određenih finih struktura unutar stanica koje se ne mogu vidjeti ili jasno vidjeti pod običnim optičkim mikroskopima i mikroskopima tamnog polja.
Princip snimanja fazno kontrastnog mikroskopa: optički izvor može proći samo kroz prozirni prsten s kružnim otvorom, koji se zatim fokusira u snop svjetlosti. Kada ovaj snop svjetlosti prolazi kroz predmet koji se ispituje, podvrgava se različitim stupnjevima odstupanja (difrakcije) zbog različitih optičkih putanja svakog dijela. Zbog činjenice da se slika koju tvori prozirni prsten podudara s konjugiranom površinom na faznoj ploči i žarišnom ravninom iza leće objektiva. Dakle, izravna svjetlost koja nije odstupila prolazi kroz konjugiranu površinu, dok difraktirana svjetlost koja je odstupila prolazi kroz kompenzacijsku površinu. Zbog različitih svojstava konjugirane površine i kompenzacijske površine na faznoj ploči, one će generirati određenu faznu razliku i smanjenje intenziteta svjetlosti koja prolazi kroz ova dva dijela. Dva skupa svjetlosti tada će se konvergirati kroz stražnju leću i putovati istim optičkim putem, uzrokujući interferenciju između izravne i difraktirane svjetlosti, mijenjajući faznu razliku u razliku amplitude. Na taj način se tijekom faznokontrastne mikroskopije fazna razlika koju ljudsko oko ne može razaznati pretvara u razliku amplitude (razlika svjetline) koju ljudsko oko može razaznati kroz svjetlost bezbojnog prozirnog tijela.
