Razlika između fluorescentnog mikroskopa i laserskog konfokalnog mikroskopa
fluorescentni mikroskop
1. Fluorescencijski mikroskop koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetla, koje se koristi za ozračivanje otkrivenog objekta kako bi emitirao fluorescenciju, a zatim promatra oblik i položaj objekta pod mikroskopom. Fluorescencijski mikroskop se koristi za proučavanje apsorpcije, transporta, raspodjele i položaja kemijskih tvari u stanicama. Neke tvari u stanicama, poput klorofila, mogu fluorescirati nakon što su ozračene ultraljubičastim zrakama; Druge tvari ne mogu same fluorescirati, ali mogu fluorescirati nakon što su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijelima i ozračene ultraljubičastim zrakama. Fluorescentni mikroskop jedan je od alata za kvalitativno i kvantitativno istraživanje ovih tvari.
2, princip fluorescentnog mikroskopa:
(a) Izvor svjetlosti: Izvor svjetlosti zrači svjetlost različitih valnih duljina (od ultraljubičaste do infracrvene).
(b) Ekscitacijski filtar izvor svjetla: odašilje svjetlost određene valne duljine koja može dovesti do fluoresciranja uzorka, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za ekscitaciju fluorescencije.
(c) Fluorescentni uzorci: općenito obojeni fluorescentnim pigmentima.
(d) Blokirajući filtar: blokira pobudnu svjetlost koju uzorak ne apsorbira radi selektivnog prijenosa fluorescencije, a neke se valne duljine u fluorescenciji također selektivno prenose. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetla kako bi ozračeni objekt emitirao fluorescenciju. Elektronski mikroskop prvi su sastavili Knohl i Ha Roska u Berlinu 1931. godine. Ovaj mikroskop koristi snop elektrona velike brzine umjesto snopa svjetla. Budući da je valna duljina protoka elektrona mnogo kraća od valne duljine svjetlosnog vala, povećanje elektronskog mikroskopa može doseći 800 tisuća puta, a minimalna granica rezolucije je 0,2 nanometra. Skenirajući elektronski mikroskop, koji se počeo koristiti 1963., može natjerati ljude da vide sićušne strukture na površini predmeta.
3. Opseg primjene: koristi se za povećanje slike sitnih predmeta. Općenito se primjenjuje na promatranje biologije, medicine i mikroskopskih čestica.
Konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop dodaje polu-reflektirajuću polu-leću na optički put reflektirane svjetlosti, koja lomi reflektiranu svjetlost koja je prošla kroz leću u drugim smjerovima. U njegovom žarištu nalazi se pregrada s rupom, a rupica se nalazi u žarištu. Iza pregrade nalazi se fotomultiplikatorska cijev. Može se zamisliti da reflektirano svjetlo prije i nakon fokusa detekcijskog svjetla prolazi kroz ovaj konfokalni sustav i neće biti fokusirano na malu rupu, već će biti blokirano pregradom. Dakle, fotometar mjeri intenzitet reflektirane svjetlosti u fokusu.
2. Načelo: Tradicionalni optički mikroskop koristi izvor svjetlosti polja, a sliku svake točke na uzorku ometat će difrakcija ili raspršena svjetlost susjednih točaka; Laserski skenirajući konfokalni mikroskop skenira svaku točku žarišne ravnine u uzorku pomoću točkastog izvora svjetlosti koji formira laserska zraka koja prolazi kroz rupicu za osvjetljavanje. Ozračena točka na uzorku snima se na rupici za otkrivanje, koja se prima točku po točku ili liniju po točku pomoću fotomultiplikatorske cijevi (PMT) ili hladno spojenog uređaja (cCCD) nakon otkrivanja rupice, a fluorescentna slika se brzo formira na zaslon monitora računala. Rupica za osvjetljavanje i rupica za otkrivanje konjugirane su u odnosu na žarišnu ravninu leće objektiva, a točke na žarišnoj ravnini fokusiraju se na rupicu za osvjetljavanje i rupicu za emisiju u isto vrijeme, a točke izvan žarišne ravnine neće slikati na rupici za otkrivanje, tako da je dobivena konfokalna slika optički presjek uzorka, čime se prevlada nedostatak zamućene slike običnog mikroskopa.
3. Područja primjene: uključuju medicinu, istraživanje životinja i biljaka, biokemiju, bakteriologiju, biologiju stanica, tkiva i embrija, znanost o hrani, genetiku, farmakologiju, fiziologiju, optiku, patologiju, botaniku, neuroznanost, biologiju mora, znanost o materijalima, elektroničku znanost, mehanika, naftna geologija i mineralogija.
