Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa, fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa je različita, uzorak se ne promatra osvjetljenjem običnog izvora svjetlosti, već korištenjem određene valne duljine svjetlosti (obično ultraljubičaste, plavo-ljubičaste) ekscitacija uzorka pod mikroskopom unutar fluorescentnog materijala, tako da on emitira fluorescentno svjetlo, tako da uloga fluorescentnog mikroskopa u izvoru svjetlosti nije izravno osvjetljenje, već kao vrsta stimulacije uzoraka fluorescencije unutarnjeg svjetla. izvor fluorescentnog mikroskopa nije izravno osvjetljenje, već kao izvor energije za stimulaciju fluorescentne tvari unutar uzorka. Razlog zašto možemo promatrati uzorak nije zbog osvjetljenja izvora svjetlosti, već fenomena fluorescencije koju predstavlja fluorescentna tvar u uzorku nakon apsorpcije pobuđene svjetlosne energije. Može se vidjeti da su karakteristike fluorescentnog mikroskopa uglavnom da njegov izvor svjetlosti može dati veliki broj specifičnih valnih duljina raspona pobudne svjetlosti, tako da fluorescentne tvari unutar ispitivanog uzorka mogu dobiti potreban intenzitet pobudne svjetlosti. Istovremeno, fluorescentni mikroskop mora imati odgovarajući sustav filtera. Fluorescentni mikroskop osnovni je alat za **fluorescentnu histokemiju. Sastoji se od izvora svjetlosti ultra-visokog tlaka, sustava filtera (uključujući filtarsku ploču za pobuđivanje i potiskivanje), optičkog sustava i fotografskog sustava i drugih glavnih komponenti, korištenje određene valne duljine svjetlosti za poticanje uzorka na emitiranje fluorescencije.
1. način pobuđivanja fluorescencije: prema rasponu valnih duljina svjetlosti se dijeli na metodu UV pobude (koristeći ultraljubičasto osvjetljenje) i BV metodu pobuđivanja (pomoću plavoljubičastog svjetla) dvije vrste metode pobude UV-a su kraće od 400 nm blizu ultraljubičastog svjetla za uzbuđenje. U ovoj metodi nema vidljive ekscitacijske svjetlosti, tako da promatrana fluorescencija pokazuje svojstvenu fluorescenciju boje, a lako je razlikovati specifičnu fluorescenciju na uzorku od samofluorescencije pozadinskog tkiva.
2. BV metoda ekscitacije: Metoda je usmjerena na 404 nm, 434 nm od ultraljubičastog do plavog svjetla za ekscitaciju. Ova metoda koristi plavo svjetlo za ozračivanje uzorka, tako da filtar za isključivanje fluorescencijskog sustava za promatranje mora koristiti filtar koji može potpuno blokirati plavo svjetlo i potpuno propustiti željenu zelenu i žutu fluorescenciju. Fluorescentni pigmenti za metodu fluorescentnih antitijela. Budući da su valna duljina maksimalne apsorpcije ekscitacijske svjetlosti i valna duljina maksimalne emisije fluorescencije blizu jedna drugoj, filtri koji se koriste u BV ekscitacijskoj metodi moraju biti filtri s oštrim prekidom. Ova metoda koristi plavo svjetlo kao pobudno svjetlo, tako da je učinkovitost apsorpcije fluorokroma veća i može se dobiti svjetlija slika. Nedostatak je što se fluorescencija ispod 500 nm ne može vidjeti, a iznad 500 nm cijela slika izgleda žuto. U metodi fluorescentnih protutijela, većina specifičnosti prosuđuje se prema boji jedinstvenoj za fluorokrom, tako da su nedostaci gore opisane metode pobuđivanja BV obično iznimno utjecajni kada se raspravlja o suptilnoj specifičnosti.
