Razlike te prednosti i nedostaci između transmisijske fluorescentne mikroskopije i refleksijske fluorescentne mikroskopije
1. Transmisijski fluorescentni mikroskop: Ekscitacijski izvor svjetlosti prenosi se kroz materijal uzorka kroz kondenzator za pobuđivanje fluorescencije. Uobičajeni koncentratori tamnog polja ili obični koncentratori mogu se koristiti za podešavanje reflektora za pretvaranje pobudnog svjetla i bočnog svjetla na uzorak. Ovo je relativno staromodan fluorescentni mikroskop. Prednost mu je jaka fluorescencija pri malom povećanju, a nedostatak što mu fluorescencija slabi povećanjem povećanja. Stoga je bolji za promatranje materijala većih uzoraka.
2. Fluorescencijski mikroskop s padajućim snopom: Ovo je nova vrsta fluorescentnog mikroskopa koji se razvio u moderno doba. Za razliku od prethodnog, pobudna svjetlost pada s leće objektiva na površinu uzorka, koristeći istu leću objektiva kao kondenzator osvjetljenja i leću objektiva za prikupljanje fluorescencije. Dvobojni separator snopa treba dodati optičkoj stazi, koja s fotouranom čini kut od 45 stupnjeva. Pobuđeno svjetlo se reflektira u leću objektiva i skuplja na uzorku. Fluorescencija koju stvara uzorak i pobudna svjetlost reflektirana od površine leće objektiva i pokrovnog stakla istovremeno ulaze u leću objektiva i vraćaju se u dvobojni separator snopa, odvajajući pobudnu svjetlost i fluorescenciju. Preostalo pobudno svjetlo tada apsorbira filter za blokiranje. Ako se koriste različite kombinacije pobudnih filtara, dvobojnih separatora snopa i blokirajućih filtara, oni mogu zadovoljiti potrebe različitih proizvoda fluorescentne reakcije. Prednosti ovog fluorescentnog mikroskopa su ravnomjerno osvjetljenje vidnog polja, jasna slika i jača fluorescencija s većim povećanjem.
Prednosti i nedostaci transmisijske fluorescentne mikroskopije
Izvor svjetla: Visokotlačna živina lampa ili halogena lampa.
Zrcalo reflektora: korištenje reflektora tamnog polja za odvajanje ekscitacije i fluorescencije.
Objektiv: Može se koristiti bilo koja vrsta objektiva.
Uzorak: Tanki uzorci prikladniji su za promatranje prijenosa.
Prednosti: ① Zbog upotrebe kondenzatora tamnog polja, pobudna svjetlost ne može ući u leću objektiva, što olakšava formiranje tamne pozadine i postizanje dobrog kontrasta, a za promatranje se može koristiti bilo koja leća objektiva. ② Kada koristite objektiv s malim povećanjem, on je svjetliji od reflektirajućeg fluorescentnog mikroskopa.
Nedostatak: Središte i visina reflektora moraju biti ispravno podešeni, inače se ne može dobiti svijetla fluorescentna slika. Zbog ograničenja žarišne duljine reflektora tamnog polja, ne mogu se koristiti debeli stakleni dijapozitivi. Područje osvjetljenja vidnog polja ne smije biti preveliko, inače može uzrokovati blijeđenje fluorescentne boje fluorescentnog uzorka. Debeli ili neprozirni uzorci nisu prikladni.
Prednosti i nedostaci reflektivne fluorescentne mikroskopije
Izvor svjetla: Visokotlačna živina lampa ili halogena lampa.
Leća za fokusiranje: Budući da leća objektiva služi kao leća za fokusiranje, nema potrebe za lećom za fokusiranje.
Objektiv: Objektiv koji se koristi mora moći propuštati dovoljno ultraljubičastog svjetla i ne proizvoditi samu fluorescenciju, bez ograničenja numeričke aperture.
Uzorak: Mogu se promatrati i debeli i neprozirni uzorci.
Prednosti: ① Budući da leća objektiva služi i kao reflektor, ne zahtijeva mnogo podešavanja. ② Korištenjem metode osvjetljenja Kolar mogu se iskoristiti učinci otvora blende i otvora vidnog polja. Numerički otvor objektiva nije ograničen, a slike visoke razlučivosti također se mogu dobiti pri velikom povećanju. Debeli ili neprozirni uzorci također se mogu promatrati, a mogu se koristiti i debela pokrovna stakalca. Druge metode promatranja također se mogu kombinirati s reflektiranom fluorescencijom, posebno s metodom fazne razlike i metodom diferencijalne interferencije prijenosa. Može se izbjeći nepotreban fenomen blijeđenja boje fluorescencije.
Nedostatak: Kada se koristi prizemni objektiv za povećanje, slika je relativno tamna, pa se mora koristiti objektiv s velikim numeričkim otvorom blende. Sustav filtara mora učinkovito odvajati pobudnu luminiscenciju i fluorescenciju.,
