Eksperimentalni principi metode izravnog brojanja mikrobne mikroskopije
Izravno brojanje pod mikroskopom pomoću hemocitometra često je korištena metoda za brojanje mikroorganizama. Prednost ove metode je što je intuitivna i brza. Stavite odgovarajuće razrijeđenu bakterijsku suspenziju (ili suspenziju spora) u komoru za brojanje između stakalca i pokrovnog stakalca hemocitometra i brojite pod mikroskopom. Budući da je volumen komore za brojanje fiksan (0.1 mm2), može se pretvoriti u ukupan broj mikroorganizama po jedinici volumena na temelju broja mikroorganizama promatranih pod mikroskopom. Budući da ova metoda broji ukupan broj živih i mrtvih bakterija, naziva se i metoda ukupnog broja bakterija.
Hemocitometar je obično posebno stakalce s četiri utora koji tvore tri platforme. Srednja platforma podijeljena je na dvije polovice kratkim vodoravnim žlijebom. Sa svake strane na platformi je ugravirana kvadratna mreža. Svaka kvadratna mreža podijeljena je na devet velikih kvadrata. Veliki trg u sredini je soba za brojanje. Brojenje mikroorganizama odvija se u komori za brojanje. Struktura hemocitometra prikazana je na slici Ⅷ-1.
Ljestvica komore za brojanje općenito ima dvije specifikacije. Jedan je veliki kvadrat podijeljen na 16 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat podijeljen je na 25 malih kvadrata (slika Ⅷ-2); drugi je veliki kvadrat. Kvadratna mreža je podijeljena na 25 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 16 malih kvadrata (slika VIII-1, C). No bez obzira o kojoj se ploči za brojanje radi, broj malih polja u svakom velikom kvadratu je isti, to jest 16×25=400 malih polja, kao što je prikazano na slici Ⅷ-2.
Duljina stranice svakog velikog kvadrata je 1 mm, pa je površina svakog velikog kvadrata 1 mm2. Nakon što je pokrovno staklo pokriveno, visina između stakalca i pokrovnog stakla je 0.1 mm, tako da je volumen komore za brojanje 0.1 mm3.
Kada brojite, obično izbrojite ukupan broj bakterija u pet srednjih kvadrata, zatim pronađite prosječnu vrijednost svakog srednjeg kvadrata, a zatim pomnožite sa 16 ili 25 da biste dobili ukupan broj bakterija u velikom kvadratu, a zatim izračunajte Pretvori u ukupan broj bakterija u 1 ml otopine bakterija.
