Principi fluorescentne mikroskopije i strukturne značajke
Fluorescentna mikroskopija je korištenje visoke učinkovitosti luminescencije točke, kroz filtraciju sustava boja za emitiranje određene valne duljine svjetlosti (kao što je ultraljubičasto 3650 u ili ljubičasto-plavo 4200 u) kao svjetlo pobude, pobuda fluorescentnog materijala unutar uzorka emitira niz različitih boja fluorescencije, a zatim se povećava kroz objektiv i okulare za promatranje. Na taj način, u pozadini jakog kontrasta, čak i ako je fluorescencija vrlo slaba, lako ju je identificirati, visoka osjetljivost, uglavnom se koristi za proučavanje stanične strukture i funkcije te kemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa plus nekih dodataka (kao što su fluorescentni izvor svjetlosti, pobudni filtri, dvobojni separator snopa i blokirajući filtri, itd.). Fluorescentni izvor svjetlosti - općenito korištena ultravisokotlačna živina lampa (50-200W), koja može emitirati različite valne duljine svjetlosti, ali svaki fluorescentni materijal ima najjaču valnu duljinu pobude fluorescencije, tako da je potrebno dodati pobudne filtre (općenito ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni pobudni filter), tako da samo određena valna duljina pobudnog svjetla kroz zračenje uzoraka, dok se drugo svjetlo apsorbira. Stoga je potrebno dodati pobudni filtar (obično ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni pobudni filtar), tako da samo određena valna duljina pobudnog svjetla prolazi kroz uzorak, dok se ostalo svjetlo apsorbira. Kada je svaka tvar ozračena pobudnim svjetlom, emitira vidljivu fluorescenciju veće valne duljine od ozračene svjetlosti u vrlo kratkom vremenu. Fluorescencija ima specifičnost, općenito slabiju od ekscitacijske svjetlosti, kako bi se mogla promatrati specifična fluorescencija, leća objektiva iza koje je potrebno dodati blokiranje (ili potiskivanje) mora biti odabrana za upotrebu.
Razlika između fluorescentnog i običnog mikroskopa
1. Metoda osvjetljavanja je obično padajuća, odnosno izvor svjetlosti projicira se na uzorak kroz leću objektiva;
2. Izvor svjetlosti je ultraljubičasto svjetlo, kraće valne duljine i veće moći razlučivanja od običnih mikroskopa;
3. Postoje dva posebna filtra, onaj ispred izvora svjetlosti koristi se za filtriranje vidljive svjetlosti, a onaj između okulara i leće objektiva koristi se za filtriranje ultraljubičastog svjetla radi zaštite ljudskog oka.
Fluorescencijski mikroskop također je vrsta optičkog mikroskopa, glavna razlika je u tome što su valne duljine pobude ta dva različita. To određuje strukturu fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa te korištenje različitih metoda.
Fluorescentni mikroskop je osnovni alat za imunofluorescentnu citokemiju. Sastoji se od izvora svjetlosti, sustava filtarskih ploča i optičkog sustava te drugih glavnih komponenti. Koristi određenu valnu duljinu svjetlosti za poticanje uzorka na emitiranje fluorescencije, koja se povećava putem objektiva i sustava okulara kako bi se promatrala fluorescentna slika uzorka.
