Zahtjevi za debljinu staklenih slajdova za optički mikroskop
Mikroskopska dehidracija i pričvršćivanje uzorka: Zbog ponovljenog centrifugiranja stanice se gube, pa je najbolje pričvrstiti stanice na površinu predmetnog stakla ili plastične folije za optičku mikroskopiju, tako da se stanice dehidriraju i osuše zajedno sa staklom. slajd ili plastična folija. Zahtjevi za debljinu stakalca u optičkoj mikroskopiji Kako bi se omogućilo pričvršćivanje stanica na stakalce ili plastične ploče, potrebno je najprije položiti sloj filma na stakalce ili plastične ploče. Način postavljanja filma je sljedeći:
(1) Najjednostavnija metoda za optičku mikroskopiju je polaganje tankog sloja polivinilnog formalnog (formvar) filma. Namočite očišćena stakalca u (0.5-1) postotnu otopinu polivinil formalnog kloroforma. Nakon što se atmosfera ispari, na slajdovima se pojavi bijeli film. Stakalca nekoliko puta protresite u kloroformu kako bi se film promijenio. Tanak i spreman za korištenje.
(2) Nakapajte 0.1 latitude poli-L-lizin (otopite 1 mg poli-lizina u 1 ml filtrirane vode tijekom pripreme) na očišćeno stakalce i stavite ga u kutiju za opskrbu na 450C nakon što se kapljica razvije . suha. Ova je metoda najbolja jer je poli-L-lizin pozitivno nabijen, što omogućuje pričvršćivanje više površinskih negativno nabijenih stanica.
(3) Dodajte plazmu i glicerol u destiliranu vodu u omjeru (30--40) posto i (3-5) posto u skladu sa zahtjevima optičkog mikroskopa za debljinu stakalca kako bi se formirao protein glicerol riješenje. Tekućina se kapne na očišćeno predmetno staklo, razvije i osuši pod optičkim mikroskopom. Položeni proteinski film uronjen je u 2 posto glutaraldehida da se protein fiksira, ispere i osuši za kasniju upotrebu. Prije upotrebe plazma se nakapa na proteinski film. Učinite ga "aktiviranim", nakon 30 minuta isperite puferom i možete ga izravno nanijeti.
Od fiksiranih i očišćenih stanica napravi se odgovarajuća koncentracija stanične suspenzije s filtriranom vodom pod digitalnim mikroskopom, a optički mikroskop se stavi na predmetno stakalce ili plastičnu foliju prekrivenu membranom i stavi u vlažnu, nisku temperatura (40C) okoliš (30-120) minuta kako bi se omogućilo stanicama da se pričvrste na membranu. Upotrijebite finu pincetu da podignete predmetno stakalce i protresite ga u čistoj dvostruko destiliranoj vodi, a nevezane stanice isperite optičkim mikroskopom. Zahtjevi za debljinu stakalca u optičkim mikroskopima Polarizacijski mikroskopi se zatim brzo stave u posudu napunjenu s 50 posto acetona (ili etanola). Postupak dehidracije sastoji se u stavljanju stakalca u aceton ili etanol uz rastuću koncentraciju svake 3 minute, a optičkim mikroskopom ili kontinuiranom povećanju koncentracije sredstva za dehidraciju u staklenoj posudi za stakalce. Prema laboratorijskom iskustvu autora, potonja operacija je prikladnija. Specifičnom metodom optičke mikroskopije može se svake 3 minute isisati polovica sredstva za dehidrataciju u spremniku, a zatim dodati jednaka količina sredstva za dehidrataciju u koncentraciji od 100 posto. Nakon 5-6 operacija, koncentracija sredstva za dehidraciju u posudi mikroskopa doseže iznad 0,5 posto, a stanice su uspješno dehidrirane. Nakon sušenja kritične točke, predmetno staklo ili plastična ploča zalijepljena je na stup uzorka vodljivim ljepilom za metalnu prevlaku. Postoje i pogodnosti za pričvršćivanje stanica na membrane postavljene trećom metodom. Optički mikroskop može objesiti stanice fiksirane niskom koncentracijom glutaraldehida na "aktivirani" proteinski film. Optički mikroskop zahtijeva da se debljina stakalca postavi na 10 minuta, a staklo ili plastična ploča se natapaju u 2 posto glutaraldehida. Nakon 30 minuta isperite filtriranom dvostruko destiliranom vodom, a zatim dehidrirajte, osušite i metalizirajte prema gore navedenoj metodi.
