PH metar - Određivanje i podešavanje pH medija
Na sve mikroorganizme utječe pH okoline u kojoj žive. Često prisutnost selektivnih vrsta sužava pH raspon u kojem rastu. Ponekad, kiselost ili lužnatost medija također može djelovati kao faktor selekcije rasta. Za medije za biokemijsko ispitivanje, međutim, pH raspon u kojem mikroorganizmi pokazuju tk aktivnost u supstratu je uži od pH raspona potrebnog za rast: stoga je važno prilagoditi pH medija očekivanom rasponu. Kada laboratorij priprema medij prema sastavu medija, potrebno je provjeriti i namjestiti pH. Treba istaknuti da čak i za već gotovu sintetsku dehidriranu podlogu koju dostavlja proizvođač (osobito za neke dehidrirane podloge zalihe), konačni pH treba izmjeriti nakon izrade eksperimentalne podloge.
Najprecizniji način mjerenja pH vrijednosti medija je pH metar. Prije uporabe mora se kalibrirati standardnom puferskom otopinom poznatog pH (obično je pH 4 do 7). Elektrodu pH metra isprati destiliranom vodom i uroniti u medij kulture u čaši, a zatim sa skale pH metra očitati pH medij kulture. Svaki proizvođač daje detaljne upute za rad za svaki tip pH metra.
Prilikom pripreme medija kulture, PH se može lako podesiti pomoću pH metra s mehaničkim miješanjem. Medij kulture treba pripremiti u posudi (kao što je velika čaša) koja se može neprestano miješati. ili magneti omotani teflonom. pH medija koji sadrži agar potrebno je podesiti nakon odmrzavanja, što se lako može učiniti pomoću grijaće magnetske miješalice. Prilikom podešavanja pH vrijednosti, prvo upotrijebite standardnu pufersku otopinu poznatog pH da biste kalibrirali pH metar. Zatim stavite kompozitnu elektrodu i otporni termometar (ako postoji) u medij, polako dodajte odgovarajuću količinu klorovodične kiseline i natrijevog hidroksida s kraja čaše dalje od elektrode, tako da medij može postići i održati potrebni pH.
Temperaturna kompenzacija pH metra treba uzeti u obzir učinak temperature na sustav elektroda: u nekim razrjeđenjima i medijima, pH se značajno mijenja s temperaturom. Za tekuće medije i razrjeđenja, pH se obično može prilagoditi i mjeriti na 25 stupnjeva ili na temperaturi na kojoj se koriste.
pH agar medija mora se podesiti nakon otapanja, a temperatura otapanja je iznad 45 stupnjeva: stoga pH krutog medija treba odrediti na temperaturi njegove uporabe. U ovom trenutku treba koristiti kompozitnu elektrodu s ravnom glavom, a temperaturnu kompenzaciju pH metra treba ručno kalibrirati. Prilikom pripreme medija kulture, ako se utvrdi da je pH medija kulture različit između stanja taljenja i stanja skrućivanja, to znači da postoji pogreška u podešavanju pH vrijednosti.
Isto tako, kada se pripremljeni medij toplinski sterilizira (npr. autoklavira), također može pretrpjeti promjene pH vrijednosti. Za dehidrirani medij proizvođač je to uzeo u obzir i obično nema potrebe podešavati pH, ali treba pažljivo provjeriti pH medija koji se koristi. Ako se pH dehidriranog agar medija mora prilagoditi tijekom ponovnog otapanja ili pripreme, najbolje ga je prilagoditi filtrom steriliziranom solnom kiselinom i otopinom natrijevog hidroksida nakon koraka sterilizacije kako bi se izbjeglo stvaranje pregrijavanja medija. Kod pripreme medija s različitim sirovinama ili lijekovima, pH medija mora se provjeriti nakon autoklaviranja. Osim toga, ako se ustanovi da se pH medija mijenja nakon svakog autoklava, pH se može prikladno prilagoditi prilikom pripreme medija. Međutim, još uvijek je potrebno odrediti konačni pH medija nakon sterilizacije.
