Prednosti i mane višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije
Višefotonska laserska skenirajuća mikroskopija je eksperimentalna metoda koja se temelji na tehnologiji laserskog skenirajućeg mikroskopa, koja pruža više **mogućnosti optičkog rezanja u 3D promatranju. Metoda pobuđivanja višefotonske fluorescencije koristi duge valne duljine crvenog ili bliskog infracrvenog svjetla za dobivanje fluorescentnih slika visoke rezolucije uzoraka uz minimalno ubijanje aktivnih uzoraka, što je čini prikladnom za snimanje živih stanica, posebno debelih živih tkiva kao što su rezovi mozga, embriji, cijeli organi pa čak i cijeli organizmi.
Prednosti su sljedeće:
1, korištenje crvenog svjetla ili infracrvenog svjetla uzbude, raspršenje svjetlosti je mala(rasipanjemaličestice i valna duljina četvrte potencije inverznog omjera).
2, ne zahtijeva rupicu, može prikupiti više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike.
3, rupica ne može razlikovati raspršene fotone koje emitira područje izvan fokusa ili žarišno područje, višefotonski omjer signala i šuma duboke slike je dobar.
4, jednofotonska ekscitacija ultraljubičaste ili vidljive svjetlosti koja se koristi u snopu da bi se dosegla žarišna ravnina prije nego što se uzorak lako apsorbira i priguši, nije lako duboko ekscitirati.
5, u promatranju biološkim mikroskopom, * prvo razmatranje je ne oštetiti aktivno stanje samog organizma, održati vodu, koncentraciju iona, cirkulaciju kisika i hranjivih tvari. U prilikama promatranja svjetla, i toplinska i fotonska energija moraju ostati u stanici bez oštećenja količine zračenja, svjetlosne energije.
6, višefotonski mikroskop također ima mnoge prednosti. Kao što su trodimenzionalna rezolucija, dubinski prodor, učinkovitost raspršenja, pozadinsko svjetlo, omjer signala i šuma, kontrola itd., postoje prethodni laserski mikroskopi koji nemaju ili imaju neusporedive izvan karakteristika.
Višefotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop proširen je na različita istraživanja i područja primjene. Sposoban je za trodimenzionalno nedestruktivno promatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i može poboljšati rezoluciju i omjer signala i šuma sustava. Korištenjem promjene svojstava materijala nakon višefotonske ekscitacije također je moguće postići trodimenzionalnu pohranu podataka o visini i trodimenzionalnu mikrofabrikaciju u bilo kojem smjeru, što ima visoku primjensku vrijednost. Može se vjerovati da će s daljnjim razvojem strojeva, materijala, laserske tehnologije i drugih tehnologija vezanih uz višefotonsku konfokalnu mikroskopiju, višefotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop biti sve veći razvoj i širu primjenu.
Nedostaci su sljedeći:
1, samo fluorescentno snimanje.
2, ako uzorak uključuje kromofore koji mogu apsorbirati pobudno svjetlo, kao što jepigmenti, uzorakmože biti termički oštećen.
3, rezolucija je malo smanjena, iakomože se poboljšati istovremenom upotrebom konfokalne blende, alidoći će do gubitka signala.
4. Cijena multifotonske skenirajuće mikroskopije je visoka zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera.
