Razlika između laserskog konfokalnog mikroskopa i tradicionalnog optičkog mikroskopa
Laserska skenirajuća konfokalna fluorescentna mikroskopija je relativno napredan instrument za analizu molekularne i stanične biologije koji koristi računalo, laser i tehnologiju obrade slike za dobivanje trodimenzionalnih podataka bioloških uzoraka. Uglavnom se koristi za promatranje strukture živih stanica i bioloških promjena specifičnih molekula i iona, kvantitativnu analizu i kvantitativno određivanje u stvarnom vremenu.
Načelo laserske konfokalne mikroskopije: koristite rupicu za osvjetljavanje postavljenu iza izvora svjetlosti i rupicu za otkrivanje postavljenu ispred detektora za postizanje točkastog osvjetljenja i otkrivanja točka. Svjetlost emitirana iz izvora svjetlosti kroz rupicu za osvjetljavanje fokusirana je na točku na žarišnoj ravnini uzorka, a emitirana fluorescencija iz te točke prikazana je na rupici za otkrivanje, a svako emitirano svjetlo izvan ove točke blokirano je detekcijom iglena rupica. Rupica za osvjetljavanje i rupica za otkrivanje konjugirane su s ozračenom točkom ili detektiranom točkom, tako da je detektirana točka konfokalna točka, a ravnina u kojoj se nalazi detektirana točka je konfokalna ravnina.
Računalo prikazuje detektirane točke na zaslonu računala u obliku slikovnih točaka. Kako bi se generirala potpuna slika, sustav za skeniranje u optičkom putu skenira u žarišnoj ravnini uzorka kako bi generirao potpunu konfokalnu sliku. Sve dok se postolje pomiče gore-dolje duž Z osi, novi sloj uzorka se pomiče u konfokalnu ravninu, a novi sloj uzorka se prikazuje na monitoru. Kontinuiranim pomicanjem osi Z mogu se dobiti kontinuirane slike različitih slojeva uzorka. Lagano izrezana slika.
Razlika između tradicionalnih svjetlosnih mikroskopa
Tradicionalni fluorescentni mikroskopi imaju nepremostiv nedostatak: fluorescentne strukture izvan žarišne ravnine su mutne i zamagljene. Razlog je taj što većina bioloških uzoraka ima preklapajuće strukture. Ako su fluorescentno označene strukture raspoređene na različitim razinama i preklapaju se, raspršenu fluorescenciju iznad ili ispod žarišne ravnine također prima leća objektiva, a rezolucija fluorescentnog mikroskopa bit će znatno poboljšana. smanjiti.
Na temelju tradicionalnih optičkih mikroskopa, laserski skenirajući konfokalni mikroskopi koriste lasersko svjetlo kao izvor svjetlosti, usvajaju princip i uređaj konjugiranog fokusiranja i koriste računala za digitalnu obradu slike, promatranje, analizu i izlaz promatranih objekata. Uzorak se može tomografski skenirati i slikati za nedestruktivno promatranje i analizu trodimenzionalne prostorne strukture stanica. U isto vrijeme, korištenjem imunofluorescentnog označavanja i sondi za ionsko fluorescentno označavanje, ova tehnologija ne samo da može promatrati fiksne stanice i dijelove tkiva, već također provodi dinamičko promatranje i otkrivanje strukture, molekula, iona i životnih aktivnosti živih stanica u stvarnom vremenu, na subcelularnoj razini Promatranje fizioloških signala kao što su Ca2 plus, pH vrijednost, membranski potencijal i promjene u staničnoj morfologiji, postalo je nova generacija moćnih istraživačkih alata u poljima morfologije, molekularne stanične biologije, neuroznanosti, farmakologije i genetike.
