Princip i strukturne karakteristike fluorescentne mikroskopije
Fluorescentna mikroskopija koristi točku s visokom svjetlosnom učinkovitošću za emitiranje određene valne duljine svjetlosti (kao što je ultraljubičasto svjetlo 3650 in ili ljubičasto plavo svjetlo 4200 in) kroz sustav filtriranja boja kao pobudno svjetlo, i pobuđuje fluorescentne tvari u uzorku da emitiraju različite boje fluorescencije. Nakon toga se promatra kroz povećanje objektiva i okulara. Na taj način ga je lako prepoznati čak i kada je fluorescencija vrlo slaba u odnosu na jaku pozadinu, uz visoku osjetljivost. Uglavnom se koristi za proučavanje stanične strukture i funkcije, kao i kemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa plus dodataka kao što su fluorescentni izvor svjetlosti, pobudni filtar, dikroični separator snopa i blokirajući filtar. Fluorescentni izvori svjetlosti općenito koriste ultravisokotlačne živine žarulje (50-200W), koje mogu emitirati svjetlost različitih valnih duljina. Međutim, svaka fluorescentna tvar ima valnu duljinu pobudnog svjetla koja proizvodi najjaču fluorescenciju, pa je potrebno dodati pobudne filtre (obično ultraljubičaste, ljubičaste, plave i zelene pobudne filtre) kako bi se dopustilo da samo određena valna duljina pobudnog svjetla prodre i zrači uzorka, dok apsorbira svu ostalu svjetlost. Nakon zračenja pobudnim svjetlom, svaka tvar emitira vidljivu fluorescenciju dužu od valne duljine zračenja u vrlo kratkom vremenu. Fluorescencija je specifična i općenito je slabija od ekscitacijske svjetlosti. Kako bi se uočila specifična fluorescencija, potrebno je dodati blokiranje (ili potiskivanje) iza leće objektiva i koristiti ga u kombinaciji.
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog mikroskopa
1. Metoda osvjetljavanja obično je vrsta padajućeg snopa, pri čemu se izvor svjetlosti projicira na uzorak kroz leću objektiva;
2. Izvor svjetlosti je ultraljubičasto svjetlo, kraće valne duljine i veće rezolucije od običnih mikroskopa;
3. Postoje dva posebna filtra, onaj ispred izvora svjetla koristi se za filtriranje vidljive svjetlosti, a onaj između okulara i leće objektiva koristi se za filtriranje ultraljubičastih zraka radi zaštite ljudskog oka.
Fluorescentna mikroskopija također je vrsta optičke mikroskopije, a glavna razlika je u različitim valnim duljinama ekscitacije. Ovo određuje razlike u strukturi i upotrebi između fluorescentne mikroskopije i obične optičke mikroskopije.
Fluorescentna mikroskopija osnovni je alat za imunofluorescentnu citokemiju. Sastoji se od glavnih komponenti kao što su izvor svjetlosti, sustav filtarske ploče i optički sustav. Koristi određenu valnu duljinu svjetlosti kako bi potaknuo uzorak da emitira fluorescenciju i povećava ga kroz sustav objektiva i okulara kako bi promatrao fluorescentnu sliku uzorka.
