Tri vrste promatranja mikroskopom
I. Svijetlo polje BF (Svijetlo polje BF)
Svijetlo polje BF je poznati način mikroskopije, koji se naširoko koristi u patologiji i testiranju za promatranje obojenih rezova, a svi mikroskopi mogu obavljati ovu funkciju.
Svijetlo polje
II. Tamno polje DF (Tamno polje DF)
Dark field DF zapravo je osvjetljenje tamnog polja. Razlikuje se od svijetlog polja po tome što ne promatra izravno osvijetljenu svjetlost, već svjetlost koja se reflektira ili difragira od objekta koji se ispituje. Kao rezultat toga, vidno polje postaje tamna pozadina, dok se promatrani objekt pojavljuje kao svijetla slika.
Načelo tamnog vidnog polja temelji se na Tyndallovom fenomenu u optici, prašina u slučaju jakog svjetla kroz izravno svjetlo, ljudsko oko ne može se promatrati, to je zbog jakog svjetla oko uzroka. Ako se svjetlost usmjeri koso na nju, čini se da se čestice povećavaju zbog refleksije svjetlosti i postaju vidljive ljudskom oku.
Poseban dodatak koji je potreban za promatranje u tamnom polju je nišan u tamnom polju. Karakterizira ga ne dopuštanje snopa svjetlosti da prolazi kroz ispitivani predmet odozdo prema gore, već mijenja putanju svjetlosti tako da je usmjerena koso prema ispitivanom objektu, tako da osvjetljavajuća svjetlost ne ulazi izravno u leća objektiva, a svijetla slika nastaje korištenjem reflektirane ili difraktirane svjetlosti s površine ispitivanog predmeta. Razlučivost promatranja u tamnom polju puno je veća od promatranja u svijetlom polju, * do 0.02-0.004
Darkfield
III. Fazni kontrast PH
U razvoju optičke mikroskopije, uspješan izum faznog kontrasta PH važno je postignuće u modernoj mikroskopskoj tehnologiji. Kao što znamo, ljudsko oko može razlikovati samo valnu duljinu (boju) i amplitudu (svjetlinu) svjetlosnih valova, za bezbojne i svijetle biološke uzorke, kada svjetlost prođe, valna duljina i amplituda se ne mijenjaju mnogo, i teško je promatrati uzorak u svijetlom polju promatranje.
Fazno kontrastni mikroskop koristi razliku raspona svjetlosti ispitivanog objekta za mikroskopski pregled, odnosno učinkovito koristi fenomen interferencije svjetlosti da promijeni nerazlučivu faznu razliku ljudskog oka u prepoznatljivu razliku amplitude, pa čak i bezbojnu i prozirnu tvari mogu postati jasno vidljive. To uvelike olakšava promatranje živih stanica, pa se fazno kontrastna mikroskopija široko koristi u invertnim mikroskopima.
Osnovno načelo fazno kontrastne mikroskopije je da se razlika u optičkom rasponu vidljive svjetlosti propuštene kroz uzorak pretvara u razliku u amplitudi, čime se povećava kontrast između različitih struktura i čine ih vidljivima. Svjetlost se lomi kroz uzorak i odstupa od izvorne putanje svjetlosti, dok kasni za 1/4λ (valna duljina). Ako se 1/4λ ponovno poveća ili smanji, razlika u optičkom rasponu postaje 1/2λ, a interferencija između dva snopa fotosinteze se pojačava nakon što su osi dva snopa ometana, a amplituda se povećava ili smanjuje, tako poboljšanje kontrasta. U strukturi fazno kontrastni mikroskop ima dvije posebne značajke koje se razlikuju od običnog optičkog mikroskopa:
1. prstenasta dijafragma (annulardiaphragm) nalazi se između izvora svjetlosti i kondenzatora, uloga je da svjetlost kroz kondenzor formira šuplji konus svjetlosti, fokusirajući se na uzorak.
2. fazna ploča (prstenasta fazna ploča) u leći objektiva obloženoj faznom pločom magnezijevog fluorida, izravna ili difraktirana svjetlost može biti odgođena faza 1/4λ. Postoje dvije vrste:
1.A fazna ploča: izravna svjetlost odgođena 1/4 λ, dvije skupine koaksijalnog dodavanja svjetlosnih valova, povećanje amplitude, struktura uzorka je svjetlija od okolnog medija, stvaranje svijetlog kontrasta (ili negativnog kontrasta) .
2.B fazna ploča: difraktirana svjetlost kasni za 1/4 λ, dvije skupine svjetlosnih valova nakon spajanja osi svjetlosnog vala se smanjuju, amplituda postaje manja, formiranje tamnog kontrasta (ili pozitivnog kontrasta ), struktura je tamnija od okolnog medija.
