Dva uobičajeno primjenjivana pristupa promatranju za mikroskope
1, Promatranje tamnog polja
Tamno vidno polje zapravo je osvjetljenje tamnog polja. Njegove karakteristike se razlikuju od svijetlog vidnog polja, jer ne promatra izravno svjetlo koje osvjetljava, već promatra reflektirano ili difraktirano svjetlo predmeta koji se pregledava. Dakle, vidno polje postaje tamna pozadina, dok predmet koji se pregledava predstavlja svijetlu sliku.
Načelo tamnog polja temelji se na optičkom Tyndallovom fenomenu, gdje ljudsko oko ne može uočiti čestice prašine kada su izložene jakom svjetlu zbog difrakcije uzrokovane jakim svjetlom. Ako se svjetlost projicira koso na nju, čini se da se čestice povećavaju u volumenu zbog refleksije svjetlosti, što ih čini vidljivima ljudskom oku.
Poseban dodatak potreban za promatranje tamnog polja je reflektor tamnog polja Njegova karakteristika je da ne dopušta snopu svjetlosti da prolazi kroz objekt odozdo prema gore, već mijenja putanju svjetlosti da bude koso usmjerena prema objektu, tako da svjetlo osvjetljenja ne ulazi direktno u leću objektiva, već koristi svijetlu sliku koju stvara refleksija ili difrakcija svjetla na površini predmeta koji se pregledava Rezolucija promatranja tamnog polja je mnogo veća nego kod promatranja svijetlog polja, dosežući do 0,02-0,004
2, Metoda pregleda zrcala faznog kontrasta
Uspješan izum fazno kontrastne mikroskopije u razvoju optičkih mikroskopa važno je postignuće u modernoj mikroskopskoj tehnologiji Znamo da ljudsko oko može razlikovati samo valnu duljinu (boju) i amplitudu (svjetlinu) svjetlosnih valova. Za bezbojne i prozirne biološke uzorke, kada svjetlost prolazi, valna duljina i amplituda se ne mijenjaju mnogo, što otežava promatranje uzorka u svijetlom polju
Mikroskop s faznim kontrastom koristi razliku u optičkoj duljini putanje objekta koji se pregledava za pregled zrcalom, učinkovito koristeći fenomen interferencije svjetlosti za transformaciju fazne razlike koju ljudsko oko ne može razlikovati u razliku amplitude koja se može razlikovati. Čak i bezbojne i prozirne tvari mogu postati jasno vidljive. To uvelike olakšava promatranje živih stanica, stoga se fazno kontrastna mikroskopija široko koristi u invertnim mikroskopima
Osnovno načelo fazno kontrastne mikroskopije je pretvaranje optičke razlike putanje vidljive svjetlosti koja prolazi kroz uzorak u razliku amplitude, čime se poboljšava kontrast između različitih struktura i čineći ih jasnima i vidljivima. Nakon prolaska kroz uzorak, svjetlost se lomi, odstupajući od izvorne optičke putanje i kasni za 1/4 λ (valna duljina). Ako se razlika optičkog puta poveća ili smanji za još 1/4 λ, razlika optičkog puta postaje 1/2 λ, a interferencija između dviju svjetlosnih zraka se povećava ili smanjuje nakon spajanja osi, poboljšavajući kontrast. U pogledu strukture, mikroskopi s faznim kontrastom imaju dvije posebne razlike od običnih optičkih mikroskopa:
1. Prstenasta dijafragma nalazi se između izvora svjetlosti i kondenzora, a njena funkcija je formiranje šupljeg konusa svjetlosti koja prolazi kroz kondenzor i fokusira se na uzorak
2. Kutna fazna ploča: fazna ploča obložena magnezijevim fluoridom dodaje se leći objektiva, što može odgoditi fazu izravne ili difraktirane svjetlosti za 1/4 λ. Može se podijeliti u dvije vrste:
(1) . A+fazna ploča: Odgodite izravnu svjetlost za 1/4 λ i dodajte dva skupa svjetlosnih valova nakon kombiniranja osi. Amplituda se povećava, a struktura uzorka postaje svjetlija od okolnog medija, stvarajući svijetli kontrast (ili negativni kontrast)
(2) . B+fazna ploča: Odgodite difraktiranu svjetlost za 1/4 λ i oduzmite svjetlosne valove nakon kombiniranja osi dva skupa svjetlosnih zraka, što rezultira smanjenjem amplitude i stvaranjem tamnog kontrasta (ili pozitivnog kontrasta). Struktura postaje tamnija od okolnog medija
