Koji su zahtjevi za uzorak za svjetlosnu mikroskopiju?
U procesu pripreme uzorka optičkog mikroskopa, debljina presjeka uzorka je između 2 i 25 um; debljina presjeka elektronskog mikroskopa je unutar 50-100nm (osim za visokonaponski elektronski mikroskop, debljina uzorka može doseći 1 um), tako da korištena metoda rezanja nije ista.
Što se tiče nosača, nosač sekcije optičkog mikroskopa je predmetno staklo, a nosač sekcije elektronskog mikroskopa je nosiva rešetka.
Što se tiče fiksacije, isječci optičkog mikroskopa fiksiraju se složenim fiksativom, dok se isječci elektronskog mikroskopa opetovano fiksiraju jednim fiksativom
Što se tiče bojanja, bojanje optičkih uzoraka je relativno jednostavno. U skladu s različitim uzorcima promatranja i vrstom optičkog mikroskopa, obično je dovoljno koristiti neke fiksne boje. Postoje mnoge metode za ponovno bojenje uzoraka elektronskog mikroskopa, a također su i vrlo komplicirane, kao što je negativno bojenje, bojenje srebrom i tako dalje.
Što se tiče ugradnje, parafin, kolodij, želatina itd. koriste se kao sredstva za ugradnju za rezove optičkog mikroskopa; epoksidna smola, polistirenska smola, izobutilenska smola i smola topiva u vodi koriste se kao sredstva za ugradnju za sekcije elektronskog mikroskopa.
Kako bi vidno polje mikroskopa dobilo ravnomjerno i dovoljno osvjetljenje, potrebno je prilagoditi sustav optičkog puta osvjetljenja kada se mikroskop prvi put instalira i otklanja greške. zahtjevi. Osim toga, pravilno shvaćanje podešavanja sustava optičkog puta osvjetljenja nužan je korak nakon zamjene žarulje u procesu korištenja mikroskopa, a također je i neophodan način da se s vremena na vrijeme testira rad mikroskopa u svakodnevni proces upotrebe. Podešavanje optičkog puta osvjetljenja mikroskopa uglavnom uključuje sljedeće 4 stavke: 1. Preliminarno podešavanje komore žarulje izvora svjetlosti izvan mikroskopa ① Prvo otvorite kućište komore lampe i stavite halogenu žarulju u utičnicu pritiskom na opružna kopča. Prljavština poput otisaka prstiju na žarulji utjecat će na vijek trajanja žarulje. ②Postavite sobu sa svjetiljkom na stol, nakon što uključite struju, pomoću posebnog odvijača podesite rupu gumba za fokusiranje na lampi (označenu s "←→"), tako da žarna nit strši na zid 1-2 m, a slika niti je podešena. Zatim podesite visinu žarulje kako biste prilagodili rupu za žarnu nit (označenu s "──") kako bi položaj žarne niti bio odgovarajući; zatim namjestite rupe za podešavanje lijevog i desnog položaja žarulje (označene s "──") kako biste lijevi i desni položaj žarne niti bili odgovarajući.
2. Svrha pregleda i korekcije položaja iluminatora izvora svjetlosti (filamenta) u mikroskopu je prilagoditi kraj slike iluminatora u vidno polje leće objektiva i osigurati da vidno polje mikroskopa je potpuno i ravnomjerno primljen iz perspektive izvora svjetlosti. Rasvjeta, koja je preduvjet za podešavanje Kühler sustava rasvjete. Potrebni osnovni alati: Teleskopi za centriranje opremljeni su kupnjom mikroskopa. ① Isključite matirano stakleno kućište kućišta svjetiljke i vratite kućište svjetiljke na mikroskop ② Odaberite leću objektiva 10×, uključite program izvora svjetla kako biste pronašli uzorak i jasno prilagodili fokus, a zatim upotrijebite objektiv objektiva 40× leća za jasno fokusiranje uzorka (40× leća objektiva. Cijela slika filamenta može se jasno vidjeti); ③ Maksimalno otvorite dijafragmu otvora blende i dijafragmu polja kondenzatora; ④ Odspojite jedan od okulara, zamijenite ga teleskopom za centriranje, uhvatite bijeli dio i produžite crni okular drugom rukom. Slika od niti se može vidjeti u vidnom polju; ⑤Ako položaj filamenta nije prikladan, podesite rupu "──", podesite sliku filamenta u vodoravnom smjeru, podesite rupu "──" i podesite sliku filamenta u okomitom smjeru dok ne podesite sliku filamenta na kružnu slika koja samo ispunjava otvor leće objektiva; ⑥ Nakon podešavanja, umetnite mat staklenu čahuru natrag u prvobitni položaj, isključite teleskop za centriranje i vratite okular za sljedeće podešavanje. Gore spomenuta prilagodba prostora za svjetiljku izvora osvjetljenja izvan mikroskopa i kalibracija položaja iluminatora izvora svjetla unutar mikroskopa potrebno je izvršiti samo kada je mikroskop prvi put instaliran i otklonjene greške i žarulja je zamijenio. U slučaju zabune, možete ga vratiti u izvorno stanje prema gornjim koracima.
3. Ispravno podešavanje Kohlerovog sustava osvjetljenja (Kohler) Ispravno podešavanje mikroskopa, jedan od glavnih zadataka je podešavanje sustava putanje osvjetljenja, a ključno je podešavanje Kohlerovog sustava osvjetljenja. Za sve koji koriste mikroskope, posebno one koji snimaju mikroslike, trebali bi imati određeno razumijevanje i ovladati principima Kühlerovog sustava osvjetljenja i njegovih koraka podešavanja, tako da mogu u potpunosti iskoristiti funkcije mikroskopa. Rezultirajuće fotografije mogu biti dosljednije i savršenijeg učinka. Načelo Kühlerovog sustava osvjetljavanja je jednostavno: svjetlost koju emitira bilo koja točka na iluminatoru izvora svjetlosti može osvijetliti vidno polje mikroskopa, a svjetlost koju emitira svaka točka na iluminatoru izvora svjetlosti se prikuplja i nalazi se u vidno polje mikroskopa. Postiže se vrlo dovoljno i ravnomjerno osvjetljenje. Svrha podešavanja Kuhlerovog sustava osvjetljenja je dobiti ravnomjerno i dovoljno osvjetljenje za promatrano vidno polje, te spriječiti da zalutala svjetlost utječe ili interferira sa slikovnim sustavom, kako bi se izbjeglo stvaranje magle na negativu tijekom fotografiranja. Bitne komponente Kühlerovog rasvjetnog sustava s visokom prilagodbom: dijafragma polja, sustav kondenzatora s prilagodbom na osi. ① Odaberite 10× leću objektiva i 10× okular ② Stavite prednju leću kondenzora u optički put, podesite dijafragmu otvora blende na umjereni položaj (ne preveliku ili ne premalu), zatim podignite kondenzor u gornji položaj i podesite okretnu ploču kondenzatora u položaj svijetlog polja "J" ③ Podesite dijafragmu polja na minimum (0,1)
④ Stavite zapečaćeni biološki uzorak na postolje, uključite izvor svjetla i jasno fokusirajte
⑤ Lokalno osvijetljeno područje ili svijetla točka pojavit će se u vidnom polju, što je zamućena slika dijafragme polja, u kojoj se detalji uzorka mogu jasno vidjeti; Jasno pogledajte detalje uzorka
⑥ Lagano spustite kondenzor, tako da se svijetla točka u vidnom polju postupno sužava i postupno postaje jasna poligonalna slika, koja je jasna slika dijafragme polja;
⑦ U normalnim okolnostima poligonalna slika nije u središtu vidnog polja. Potrebno je namjestiti par vijaka za centriranje kondenzora kako bi se poligonalna slika vidnog polja prilagodila središnjem položaju;
⑧ Postupno otvarajte dijafragmu vidnog polja kako bi poligonalna slika postala upisani poligon vidnog polja i dodatno provjerite stanje poravnanja. Ako poravnanje nije idealno, nastavite lagano podešavati vijak za poravnanje;
⑨ Lagano otvorite dijafragmu polja kako bi poligonalna slika nestala na rubu vidnog polja. U ovom trenutku je dovršeno podešavanje Kühler sustava rasvjete. Nakon podešavanja Kühlerovog sustava osvjetljenja, cijelo vidno polje je ravnomjerno osvijetljeno, a mikrofotografije su bile svijetle i jasne s normalnim kontrastom.
